抽象性

开发微生物和细菌毒素疫苗并有可能用作生物战剂和生物恐怖剂是美国生物防御程序的一个重要组成部分。DVC开发两种疫苗,一种防吸入接触butlinum神经毒素A1和B1叶西尼亚虫最终目标FDA发布动物规则在所有技术领域都取得了进展,包括制造、非临床和临床开发测试疫苗和检测开发本章描述开发这些疫苗的现状和尚存挑战。

开工导 言

某些高致病性微生物及其产品有可能被用作攻击军事或平民人口的武器。疾病控制预防中心根据接触后后果的严重程度将这些物剂归为三大类之一(A、B或C)http://emergency.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp脱机访问2011年4月7日美国国防部有开发治疗学和预防学(疫苗)的悠久历史,以保护战士不受攻击使用这些代理物。直至最近,这些对策可以在调查性新药应用机制下使用DoD授权美国战士经管的任何此类产品均需美国食品药品管理局许可DVC开发两种疫苗其中包括抗吸入A1和B1神经毒素血清型复用疫苗以及防吸入接触肺病复用疫苗叶西尼亚虫高山市Y.虫) (rF1V)具体性能和监管需求、进度、挑战和成功

二叉疾病特征学

2.1.博土主义

生物素由细菌生成神经毒因克隆肉毒杆菌高山市C.肉毒杆菌和疾病以不同形式出现,包括婴儿、伤口、成人殖民化和食源生物制一号..临床图片归结为胆碱基抑制症,特征符号包括下降肌肉弱、干口、难吞、稀疏言语、双或模糊视觉和滴眼柱肉毒杆菌神经毒素最终导致呼吸系统瘫痪,防止非辅助呼吸并在短期内导致死亡接触气溶化BONT后产生另一种形式疾病,即吸入机能学,产生相似症状2..当前,吸入中毒后人类致命性唯一参考点是根据DoD建模估计和从非人原型研究推断推理(均基于BONT/70千克体重)和BONT血位BONT血清A估计肌肉内接触值介于0.09至0.15华府g/70kk体重从0.7到0.9华府g/70kg根据NHP研究外推法吸入体重2,3..BONT血清型B估计人命缺失生物论者院内BONT值通常小于10鼠腹部致死剂量50%_50码/ml2..

在美国,生物案例处理通常包括equine反毒和辅助护理equine反毒物包括许可双价单价反毒物,内含对BONTA/B和E型分别中和抗体,以及调查式七价抗毒物七价botulinum反毒协议(HBATCangeeCorporation)通过CDC赞助IND协议提供双价单价产品2010年3月过期后,HBAT成为美国唯一可用于自然生成非生物化的肉毒杆菌抗毒剂婴儿肉毒杆菌案例使用最近经许可的BabyBIG处理,BabyBIG取自人捐血者注射五价类类毒素疫苗NHP接触致命挑战时,只有在接触后18至36小时内实施处理才有效。

2.2.瘟疫

瘟疫感染Y.虫通常从鼠类传播到人时 人被受感染跳蚤咬疾病有三种表现方式,跳蚤咬通常引起脉冲形式,其中流出淋巴结发生痛苦膨胀4,5..左转未处理,感染大约半数案例会导致败血症和死亡Bubo编队并不存在二型疾病,直接导致败血症,约三分之一病例发生于此Bubonic和Ecosic感染偶发向二级肺炎感染染色体Y.虫也很少通过吸入生物发生,1至6天后,该疾病表现为气压形式,几乎总是致命的,除非患者在20小时内接受抗生素求治6并因咳嗽时生成的呼吸滴而从人向人传播7-11..临床信号包括用咳嗽发烧和wispnea, 并可能产生血腥水素Nausea、呕吐、腹痛和腹泻也可能出现

抗生素对生存至关重要,除及早诊断和处理瘟疫外,美国没有经许可的瘟疫疫苗可用生产全细胞瘟疫疫苗Y.虫)前许可Plugue疫苗美国药典于1999年中止此外,疫苗无法有效预防初级肺病

3级DoD疫苗性能需求

需要疫苗避免呼吸道接触肉毒杆菌神经毒素和瘟疫DVC开发这些疫苗时以DoD性能要求为指导,并按动物规则展示效果(21CFR601.91分节H,“人能研究非道德或不可实现时生物产品批准”。

DoD产品性能基于能力开发文档提供用户需求一号)对于本文描述的两种疫苗,关键性能参数为FDA许可所有其他需求都定性为阈值(即绝对最低可接受性能水平)或目标(被视为理想性特征)。表2一号RBVA/B和RF1V疫苗的其中一些特征列表这些需求构成产品开发期间评估基础

鉴于FDD医疗对策的最终关键性能参数,整个生命周期开发计划与私营部门开发的产品没有异差。开发DoD产品还必须符合购置规则(联邦购置规则、国防购置规则补充等)。此外,这些方案还须接受国防资金,而这种资金并不总是像商业开发那样灵活。

4级规管策略:FDA动物规则

RBVA/B和RF1V疫苗许可使用FDA动物规则动物规则由FDA制定,允许开发和封装产品使用传统效果测试无法获取许可动物规则可用于启蒙效果研究因高致病性不道德时使用,而疾病在性质上十分稀有,现场研究要么不可能,要么至少不切实际(http://www.fda.gov/OHRMS/DOCKETS/98fr/053102a.htm脱机访问2011年4月7日

林业局动物规则四大需求如下:i)需求一:有合理理解的病理机制对物质产生毒性并预防或大幅降低产品毒性二)需求2:效果表现在一个以上动物物种中预期响应预测人性,除非效果表现在单个动物物种中,它代表出充分特征化动物模型预测人性响应三)需求3:动物研究端点显然与人类期望利益相关,通常与增强生存或预防重大发病相关四)需求4.:产品动能学和药理学数据或信息或其他相关数据或信息允许动物或人类选择有效剂量

截止2011年7月,FDA动物规则下未批准任何疫苗,因此与获取许可相关的时间长度和费用尚待确定。传统启蒙从发现到批准可能需要15年时间FDA动物规则批准疫苗可能需要较长时间,因为非临床需求增加(图二)一号并需要开发并描述动物模型和挑战系统

5级RBVA/B和RF1V疫苗开发

RBVA/B和RF1V疫苗候选者最初开发于美军传染病医学研究所开发初期转至JVAP(后转至DVC)。目标表示这些疫苗保护18至55岁成年人避免吸入BONT/A1、BONT/B1或Y.虫.

RBVA/B疫苗候选12包括50kDa盒式重链反原A和反原B单个表达Pichia面条使用甲醇感应系统反原A取自BONT/AC.肉毒杆菌NCTC 2916(第一类蛋白解析法)和egenB取自BONT/BC.肉毒杆菌rag丹麦语(I组,蛋白解析法)反原A修改后通过消除蛋白易变氨酸codos编码防止N-Terminus基因表达过程分解0.5毫升RBVA/B-40混合华府g抗原A20华府g抗原B吸附 Alhydlegel

RF1V疫苗候选鼠疫13由F1封装蛋白和Vyruce蛋白组成Y.虫科罗拉多92(CO92)编译成单蛋白esherichia大肠杆菌高山市E.西里岛并配制 Alhydlegel

对任何产品而言,通关成功进展需要整合不同功能组开发从研发检验概念中可扩缩制造过程,协调适合测试的人工材料发布之间的物流工作并展开适当的非临床和临床研究RBVA/B和RF1V疫苗的进展描述如下:制造、非临床和临床工作

5.1.制造过程

rBVA/B和rF1V疫苗最初开发于USAMRIID并转至高级开发阶段2.黑箭表示每种产品制造开发阶段产品成功克服了向本制造阶段推进的下列挑战:(1)技术转移面向合同制造组织和流程重新设计设备;(2)开发支持生产临床实验材料并可以验证的制造方法;(3)与增加所需当量或不可缩进技术步骤相关联的扩展问题;(4)开发产品量化、纯度和流程杂质所需的试剂和分析方法;(5)确定支持产品在整个制造过程稳定的条件

上头Pichia面条抗原A和抗原B表达式菌株主机库和工作室库生成RBVA/B疫苗抗原A和抗原B单独制造并吸附 Alhydlegel并合并成最终配制散装疫苗制造流程为商业规模(100L抗原A和600L抗原B)。当前良好制造实践填充/整理活动为5 000小瓶级支持阶段1B和阶段2临床试验当前开发FDP制造流程正在向全商业规模缩放(约300 000小瓶/小滴)。

fled RF1V蛋白由F1封装蛋白和Vvruring蛋白组成Y.虫制作方式E.西里岛并配制ajivant AlhydlegelRF1V抗原序列编码取自USAMRIID制作的PPW73113并先从pT5.F1V.1单元格库表示,后由pPW731细胞库表示两种表达式系统都使用相同的管理元素来表示基因和相同的抗生素抗基因来维护粒子细胞库按照FDA和ICH指南对纯度、特征和适配性定性制造流程缩放为最终商业流程,即1 500L工作量发酵和500L净化尺度

每种疫苗的临床批量制作并发布供完成阶段1和持续阶段2试验使用,描述如下稳定程序持续进行,设计目的是建立、维护并执行一项符合FDA和ICH指南的测试策略

5.2非临床研究支持动物规则

动物模型对FD动物规则发布至关重要,因为这些模型用于评估疫苗效果,而疫苗诱导动物免疫响应则比作人类免疫响应预测临床效果2009年发布《行业-动物模型-关键元素解决动物规则下效率问题指导草案》,指导非临床研究的设计与实施非临床计划与每种疫苗的临床开发计划相融合,支持跨物种免疫响应比较,并能够选择适当的人体用量

下述动物研究是在委派研究主任和兽医监督下在认证设施进行的,并按研究所和DoD核准的动物协议执行尽一切努力尽量减少动物受挑战物或程序约束的痛苦和困苦,使用经批准的麻醉剂(macques和Isoflorane小鼠为1-6mg/kgTelazol)。研究设计阶段咨询生物统计家,以确保研究使用适当数目动物实现可解释数据动物在生命阶段每天多度观察临床病状Macaques用过量安乐死代理实现预批安乐死标准时用过量安乐死进行人性化和人性化化化处理,例如减温至<93.0oF,>20%体重下降预疑权、呼吸困难/故障、活动量显著下降(例如无法自理、完全缺乏活动、持久敬重或完全瘫痪)或肺炎征兆Mice使用CO₂鼠尾服过量注入腹部或直接注入心脏

USAMRIID使用研究材料和实验批量进行的概念验证研究证明RBVA/B和RF1V疫苗在各种动物模型中的免疫性和效率,包括鼠类和NHPsRBVA/B和RF1V非临床开发计划继续阶段测试:(1) 进行初始毒性研究支持临床开发;(2) 开发并描述气溶胶挑战模型;(3) 识别导出免疫响应的免疫规程与临床志愿者所观察响应相似;(4) 展示动物模型效果;(5) 进行最终关键防毒/气溶胶挑战与生殖毒性研究

良好实验室实践非临床安全研究支持RBVA/B和RF1V疫苗临床测试经评价小鼠重复服药后的一般毒性和兔子全量使用疫苗后局部自适应性对RBVA/B疫苗进行了另一项研究,评价神经行为毒性疫苗没有产生明显的系统毒性,注入点只产生温和发炎RBVA/B疫苗没有产生明显的神经行为毒性非临床研究加在一起支持启动阶段1临床试验

开发动物模型的一个重要方面是要求特征化挑战代理非临床效果研究使用的挑战代理物被CDC归为A类选择代理物,所有拥有或转移挑战代理物的美国设施都必须向CDC和/或美国农业部注册BONT/A1和BONT/B1完全确认身份、纯度和强度(生物活动或能力)。蛋白浓度和生物活动(指MIPLD_50码BONT两个单元分别使用微布拉德福蛋白解析法和鼠标(toxin)能力解析法验证建立测试协议以监测转接BONTs实时加速稳定稳定性程序包括年度测试确认强度和纯度使用微-布拉德福蛋白解析法、鼠标能力解析法、SDS-PAGE和尺寸排查色谱法

RF1V挑战研究使用CO92或C12菌株Y.虫.为确保这些菌株的质量和完整性,挑战素材生长、特征化并存储于三级银行系统银行特征为:(1)选择介质纯度,(2)tier,(3)pheno类型,(4)gram染色度,(5)聚合物链反射

动物规则第一需求与理解毒理病理机制相关并证明病理学与人相似这是一项重大挑战,当人类疾病资料很少时(例如吸入物学)尤其如此。通常需要两种动物类研究,除非该疾病在一种动物类中特征清晰,并被接受为人类病模型RBVA/B和RF1V疫苗开发程序开发Y.虫.动物特征与人类已知特征的比较见表2并3.

BONT/A1和BONT/BI确定为CD-1鼠和白鼠(未发布)和最近Rhesusmacques14..使用阶梯法估计吸入中值致命剂量_50码和接触集中_50码)对每个物种的气溶胶接触病理响应进行了评价,以确定效率研究的相关端点。小鼠和Rhesusmaques最相关的病理响应是死亡和开发生物学临床信号所有物种的临床观察均与人体体病增量的公认模式一致(表)。2)观察到对每种物种的致死性以及临床信号的发端和持续时间有相当程度的剂量响应小鼠或Rhesusmacques没有观察到临床血学和化学及毛科和微科病理学发生重大变化。physusmacques遥测物理参数变化与死亡率无关

病理学导出Y.虫仅通过临床化学学、血科学、遥测Cynomulgusmacques(CMs)对动物CO92进行了评价,瑞士Webster小鼠和CMs详细组织病理学多条肺炎、大字和淋巴组织细菌渗透、发烧、败血症和死亡取自鼠标模型开发研究的数据估计LD_50码CO92约2 000聚居单元

CM中,吸入用量计算使用总累积潮流量计算,计算时用分片摄影测量15..LD_50码估计普尔比特分析24cfu远程测量为临床病历提供有用信息,临床观察无法捕捉温度上升常与二元节律损失同时并发,而心和呼吸速率提高后不活动则与致命结果密切相关。全CM带Y.虫正血文化因肺炎瘟疫死亡肺部所有CMs病理学与人类所描述的肺鼠疫病理学一致重要结果对比表内各种3.

5.3动物模型中识别疫苗接种规程并显示效果

动物规则第二项要求涉及证明对反措施的反应在动物和人方面相似。第三个需求是在动物中显示与给药人预期相同的端点RBVA/B和RF1V疫苗端点为生存

RBVA/B程序为NHP提供相同的材料供健康成人临床试验使用,并遵循人用免疫计划鼠标使用缩排BONT/A1和BONT/B1对CD-1小鼠和Rhesusmaca动物模型识别出类似抗体水平的剂量,并使用阶段3临床素材用于枢轴动物研究

rhsusmacques初步效果研究证明使用识别防疫程序保护不受气溶胶挑战使用被动转移研究评估人体诱导的抗体水平保护效果开发并使用实验鼠被动转移模型证明人体RBVA/B疫苗净化免疫球素保护效果17..

RF1V程序使用类似方法CMs和小鼠的疫苗服甲研究正在进行中,使用2b阶段临床试验使用的材料评估免疫响应和效果第一个目标是评价五大疫苗用量以选择疫苗用量供后续研究使用。二级目标是收集所有群落动物血清,供被动转移研究评价,并判定ELISA桥反机型后续研究旨在确认疫苗最小保护用量并估计rF1V喷雾动物中与活性喷雾接触相关联的抗体最小量Y.虫CO92

开发鼠标被动转移模型以评估免疫系统保护不受气溶胶挑战的能力Sera从CM或人类志愿者打RF1V测试模型并描述结果18号..CMs生存和抗体水平之间确定相关关系仍有待确定

方法满足动物规则需求汇总于表4RBVA/B和RF1V疫苗详解简言之,动物模型与接触人体所观察到的相似疾病特征正用于评估免疫所诱发的免疫响应和效果迄今进度状况具体需求显示于表4.GLP关键非临床效果研究的设计和统计分析计划需要准备并与FDA讨论研究目标将是生成数据支持动物规则要求以证明有效性并推断出有可能对人体产生临床益惠的剂量研究将使用阶段3实验材料,并同时评估生殖毒性

5.4临床测试和人的安全

RBVA/B和RF1V疫苗候选者在第一阶段和第二阶段临床试验中测试或正在测试所有临床实验均由独立专家组成的科学功绩评审委员会评价,并获独立调查评审委员会和美军人类研究保护局批准研究由签约临床研究组织管理安全由独立医生持续监控并受数据安全监测局监督所有研究均按美国适用的联邦规则(21CFR部分50、56和312)和ICH指南的要求,按当前良好临床实践进行

男性和女性志愿者签署知情同意表后被招聘并评估合格性主体必须是健康的,标准筛选评估确定包括医学历史、物理检验和实验室测试(化学学、化学学和尿解分析)。rBVA/B实验排除有神经系统失常历史、免疫系统失常或前排肉毒毒素治疗测试两种疫苗时,有免疫抑制药使用历史的题目,包括凝胶类素和最近的免疫排除于研究范围外研究疫苗注射为0.5mlIM

安全监控包括收集注入网站和系统自适应性数据,编程通过交互语音响应系统编程,接种后评估处理突发事件特设必要时访问研究全过程喷射网站响应(局部响应)定义为疼痛、温柔、普里图斯、红度/红度、其他疹子和膨胀或延展预定系统响应包括发烧、疲劳、近似症、头痛、恶心、呕吐和腹泻系统任何其他器官表示器也将记录并评价为负事件AEs分级工作通过对FDA最新的预防疫苗临床测试中毒性分级指南进行逐项修改来完成。异常实验室值、异常关键符号或异常物理发现经调查员认为具有临床意义或符合一级或更高毒性分级标准时报告为AE

5.5RBVA/B临床测试

RBVA/B疫苗分两个阶段(rBVA/B-01和rBVA/B-01B)和一个阶段2(rBVA/B-02临床试验未发布)对成人(18-45岁)评价采集血液以确定NAC对BONT/A1和BONT/B1使用MNA预定间隔并计算血清转换率采集血液用于被动转移研究以评价动物效率

第一次测试RBV A/B-01是单中点开标降值研究,旨在评价RBVA/B三次升值安全性、可耐性及免疫性华府g20华府g和40华府g全免试蛋白并发自Adjivant)华府g完全免疫蛋白44名志愿者参加了这项研究,4组处理组各11名第二项研究RBVA/B-01B后续研究评价配方疫苗使用两次剂量(40次)华府g和100华府g总免疫蛋白质使用四种三种方法表(0日、28日、56日、0日、28日、112日或0日、28日、182日或0日、56日、182日)。阶段1B研究增加第三剂疫苗预期会提高免疫响应水平和持续时间80名志愿者参加了这项研究(每批疫苗接种10名志愿者,每组剂量40名志愿者)。DSMB审查两个研究中所有安全数据后, dose升级为更高用量

多数义工至少经历一次TEAE测试,多数AE测试在第一阶段临床试验中强度适中自限约30%TEAEs被认为与防疫相关,通常由注入网站反应组成,而疼痛最常见普鲁里图斯、红肿和肿胀报告少得多最常见的系统响应包括头痛、腹泻和不适实验室测试结果中偶发异常最常发生染色素变化,大多数自愿者在接种后报告,但被认为不具有临床意义,从基准到每次研究结束(上次接种后6个月),群组内部或跨组没有显著变化无严重不良事件TEAEs总体发病率和行政网站响应率在接受RBVA/B疫苗组别中比仅在RBVA/B01研究中接收抗原组别高研究中均未发现跨组群受附带rBVA/B关系

RBVA/B-01试验中,至少80%的志愿者接种两种最高剂量(20例)。华府g和40华府g全免疫蛋白)rBVA/B开发持久NAC高于NAC抗BNT/A1和反BONT/B1抗体下限量化单生配方非免疫性rBVA/B-01B测试中三剂调试华府g或100华府gRBVA/B疫苗检测出BONT/A1和BONT/B更长的疫苗接种时间表(第182日第三次接种)引出比短时间表更高的NAC(第56日或112日第三次接种)。基于最大NAC和抗体运动学,0日、28日和182防疫排程引出最高NAC水平,剂量间没有重大差分

RBV A/B-02第2阶段测试多点盲点随机化研究,旨在评价RBVA/B单剂量40的安全性、可耐性和免疫性华府g总免疫蛋白比萨林安慰研究中共有440名志愿者分配到2组共165个科目,每组共接收rBVA/B和2组共55个科目共接收Saline上次接种12个月后对题目进行了跟踪临时数据持续4周最终数据分析尚未完成

几乎所有自愿者都至少经历一次AE,接受过疫苗处理和安慰剂处理的自愿者人数大致相同。多数AE强度温和或中度,处理组别中TEAE总发生率没有差别三大题因可与疫苗接种相关AEs中止使用(Allengic皮肤炎、红肿和肿化,全部注入网站)。没有SAE研究疫苗更多接受RBVA/B报告注入网站响应者比接受安慰剂响应者多,最常见的是疼痛、温柔、膨胀、红肿、普里图斯和轴心疼痛最常见的系统反应有头痛、心痛、动脉动脉动、感觉异常、发烧、焦虑、不适和恶心多数TEAEs实验室值超出正常范围,按协议报告为AEs约96%受RBVA/B或abo处理最常报告实验室AEs比基准下降或比基准提高,处理组别之间没有显著差别多数实验室相关TEAE被认为轻度或中度,不具有临床意义,不处理即解决

反BONT/A1和反BONT/B1最高中和率在第210天即最后一次疫苗用量后28天进行观察,两种疫苗接种都相似最终数据将评价免疫后一年的响应

5.6RF1V临床测试

RF1V疫苗在一阶段1和二阶段2临床试验中评价第二阶段临床试验正在进行中RF1V-01测试中18至40岁和RF1V-02a测试中18至55岁男女志愿者签署知情同意表后被招聘并评估合格性这些研究按rBVA/B描述进行、监控和评审ELISA桥测量抗体聚RF1、RV和RF1V采集血液用于被动转移研究以评价动物效率

第一次测试RF1V-01为单中点开标降值研究,旨在评价RF1V双剂量定值安全性、可耐性及免疫性华府g,40华府g80华府g和160华府g总免疫蛋白质)44个题目参加研究,每组11个基于对免疫性数据的分析,扩展研究评价第三剂160效果华府约230天后施用11个对象中的8个原曾接受相同疫苗用量最后一次接种后所有自愿者都跟踪180天

所有志工都至少体验过一次TEAE,喷射网站响应最常关联TEAEs,一般温和或中度,在两三次接种后最高剂量中更多使用最常见的注入响应是疼痛 肿胀 和染色体系统反应认为与接种有关包括头痛、疲劳、恶心和腹泻其中大多数反应也是温和或中度反应,不被认为具有临床意义实验室没有发生临床重大或相关变化与第一次接种相比,第二次或第三次接种后TEAE频率没有明显增加串行心电图在所有组别前两剂后记录,没有发现临床重大异常

RF1V疫苗在两剂20后产生免疫华府g,40华府g80华府g或160华府g疫苗接受三剂160的自愿者抗体响应明显增加华府g疫苗响应二百六十华府g剂量峰值GMC所有三种抗体测试(反RF1、反RV和反RF1V)发生14天后使用第三剂还提高所有三种抗原的可检测抗体率基于这项研究,两种最高用量(80)华府g和160华府g)被选进三剂量定理系统2a阶段研究评价

rF1V-02a阶段测试多点盲目研究,旨在评价RF1V三种配方安全性、可耐性和免疫性(0日、28日、182日和0日、56日和182日)华府g和160华府g总免疫蛋白质)研究有400个题目(每组100个)上一次接种疫苗后12个月跟踪遗科

所有科目都至少经历一次TEAE测试,没有观察到跨组总体发生率在统计学上有显著差异共有六位志工因TEAE中止工作,二位因注入网站响应多数TEAEs温和或中度强度没有SAE研究疫苗多数义工使用TEAEs接种后28天内发生,主要为注入网站响应多数反应温和或中度强度,最常用的是疼痛、肿胀、红斑和普鲁图斯最常见的系统响应是头痛、不适、恶心和腹泻多数反应也是温和或中度反应最常见的实验室异常报告为AEs增加血液甘蓝和尿液中的蛋白质并减少HemolobinTEAEs零散化,与其他临床异常无关,不经处理解决总的来说,没有任何临床意义趋势显示在任何疫苗接种组、剂量或调度中改变实验室参数整体80华府g剂量比160略高安全耐受性剖面华府g用量和Days0、56和182调度比Days0、28和182调度略高安全易容性此外,自接种后28天内当地或普通TEAE率似乎没有提高。

免疫性数据表明,反RF1、反rV和反rF1抗体GMC血清转换率不可分于接种3后选定剂量和调度接受0日、56日和182天疫苗接种的两组显示反RF1、反rV和反rF1GMCs和血清变换率比接受0日、28日和182天疫苗接种的组高7天基于研究结果80华府g剂量和Days0、56、182免疫计划被选为2b阶段临床试验的进一步测试此外,2b阶段临床试验正在评价缩短接种时间表,以评估提前实施第三次接种是否实现等效免疫

完成人体试验时RF1V疫苗安全并被使用剂量和调度规程所完全容忍,并引起对疫苗重组抗原(rF1V)及其每一组件(rF1和rV)的免疫响应

6级连接动物响应预测人类效能计划

FDA动物规则下发放疫苗的最难挑战之一是连接动物和人免疫响应,证明动物研究生成的定性和/或定量免疫响应与人体观察响应相关并可用于预测临床利益和确定有效剂量这需要验证解析,作为连接动物和临床数据相联保护相关挑战变得重要,如果豁免机制不为人所理解,如鼠疫案例

6.1.rBVA/B程序

动物展示出BONT专用抗体保护能力19号-23号..Iakovlev于1950年代完成大部分解释中和抗体相关保护性基础工作。 Iakovlev证明向鼠和小鼠提供被动豁免足以保护这些动物免入血型BONT24码..sera中BONTA/BNACs使用卡德拉法用鼠标中和反体解析法评估25码..NAC被公认为保护对象不受BONT

人类迄今研究结果显示RBVA/B疫苗安全性强、耐受性强和免疫性强观察到保护动物的反BONTNACs将比作接种人体所见NACs预测人体临床利益上文指出,动物疫苗用量选择基于其引导NAC能力,类似于诊所获取的NAC能力,这些疫苗用量和定理将用来评估枢轴研究效果面向观察人响应的被动转移研究将是显示rBVA/B疫苗保护人和连接临床和非临床信息能力的重要方法

6.2rF1V程序

对比之下,没有公认的解析与保护不受Y.虫.动物防肺鼠疫Y.虫F1和V抗原26,27号..F1为17kDa蛋白质组成胶囊并可能干扰辅助介质化26,28码..37kDaV毒理元件是类型3分解系统的一个组成部分,称为“Yopvirulon”。Yopvirulon通过从细菌细胞注入效果器蛋白诱导主机分片分解V抗原为响应环境刺激而隐蔽,对毒理学至关紧要27号,29独立并自成一体地促进Yop效果器移位

F1和V抗原诱导小鼠、NHPs和人以手机为介式的免疫响应7,13,30码-38号..F1专用单克隆抗体向鼠标被动转移证明幽默响应能力有助于保护不受bunocy和Nemonoic鼠标并用F1+和F1菌株保护小鼠避免气溶胶挑战Y.虫[三十九,40码..最近多克隆单克隆抗体对RF1、rV或rF1V保护幼鼠不受子膜内喷雾Y.鸡尾酒[41号,42号提供补充证据 保护作用抗体

较少人知道细胞介质免疫作用 提供防瘟疫保护由T细胞隐蔽的子宫 包括IFN南锥体和TNF-α即被认为激活phaocytes,限制细胞内部Y.虫正在研究复制并便利杀细胞内bacilli37号..此外,这些细胞素似乎通过幽默响应对保护有帮助,因为这些细胞素中和小鼠接受次优F1或V特效抗体会显著减少这些小鼠生存[38号..塞托金活动用单片中和反机干扰主动或被动注射受呼吸道挑战小鼠的保护Y.虫CO92[43号..IL17保护不受Y.虫并正在调查44号..

连接RF1V免疫响应预测临床益益更具挑战性人所共知的幽默响应Y.虫数例反机构解析正被考虑支持连接包括桥梁ELISA3)被动转移抗体和宏图细胞毒性解析

6.3桥梁ELISA

ELISA桥使用rF1、rV和rF1V抗原评价对rF1V疫苗接种的幽默免疫响应,使用单标准曲线可直接比较临床和非临床样本解析基础是用板覆盖F1、FV或F1V抗原绑定抗体通过添加稀释生物基抗原(rF1、rV或rF1V)检测,并继之以马铃薯过敏相容streptavidin解法和四甲基苯基鸡IgY标准曲线用于量化测试血清中的抗体等级RF1RV和RF1V图中显示RF1V桥ELISA3RF1和rV检验使用相同格式

桥梁ELISA相对于标准直达ELISA的关键长处是相同的试剂在不同解析中使用,方式上有能力中和物种中性物种的好处是避免偏向由特定物种二级试剂引入ELISA桥限制在于它不是功能解析评估免疫区保护性抗体,而是测量任何能绑定抗原的抗体,而不论其保护能力如何。

ELISA桥测量梯子统计评价与小鼠和CM直接挑战研究求生数据相关迄今获取的数据显示持续趋势与生存相关联,但需要从补充研究中获取数据,以充分评估该分析作为关联值的实用性类似地,需要二二二测试的免疫性数据来分析人类响应与动物乳头和效果

6.4.被动传递研究

被动转移研究评估抗体综合保护能力F1和V鼠标被动转移系统曾用于支持1941年一项决定,即为面临鼠疫bacilli致命鼠疫严重威胁的军事人员接种疫苗读出鼠标被动转移估计百分数和时间死前比称鼠标保护索引基于动物数据,MPI值被采纳为可靠指标,用于预测非临床鼠疫疫苗效果研究中的存活率,并判定何时需要增强器对人[45码,46号..

被动转移系统包括从注射动物或人到免疫机Y.虫神经小鼠药代物学研究完成后,小鼠在血清台高原接触气溶胶挑战完成CM-mouse被动转移分析结果显示,幽默豁免与防肺鼠疫保护相关生存分析结果显示抗体水平与生存关联,尽管鼠标或捐者血清中尚没有特定水平的循环反体(ant-rF1、反rV或反rF1V)被定义为提供特定保护小鼠群中平均生存时间接收免疫比控制鼠中值生存时间大接收鼠生存、死时和MPI统计评价与生存相关联,在小鼠和CMS直接喷雾挑战研究中临床实验中的人类日志也在BridgeELISA和被动传输系统进行统计测试和评价,以连接动物数据

6.5宏图子子毒理分析

Y.虫其余病原种叶西尼亚州细胞毒性大型词组和抗分片分片体,但细胞毒性和抗药性可以通过反V抗体中和.数大字表示免疫受感染Y.虫报 告47-51号..

Y.虫诱导大型细胞死法主动调查中测试RF1V排空个人免疫血清中和能力叶西尼亚通过测量Caspase-3级的下降诱导宏毒密钥解析组件包括鼠标大字类细胞线J774AY.pseudotuberculosis高山市Y.平方公尺 内生V基因代之以V基因Y.虫血清样本注射个人 Enzchekcaspase3II工具箱使用微值含氟度解析法和Capsase-3专用底板Z-DEVD-R110测试可行性评估 潜在关联解析

sera用V或RF1V打针兔子首次评价,以验证免疫系统中和大型细胞毒性和量化检测血清细胞毒性活动差异的能力细胞毒性检测是在USAMRIID进行的,前文详解48号和血清中和值_50码)确定性NT_50码值对应血清稀释导致caspase3级下降50%双振度解析中观察到良好剂量响应由回归分析确定,兔子反射机产生NT_50码值范围从157到1384血清反RVELISAtiers和NT之间没有关联_50码传值48号数据不显示)宏图分析从rF1V空耗鼠、macaques和人类义工sera得到的初步评价结果高度显示动物或被动鼠转模型的保护性

6.6.RBVA/B和RF1V开发努力剩余挑战

关键非临床研究 和阶段3实验关键研究前需要克服的最重要技术挑战有商业规模成功制造、验证过程和解析,以及确定预测RF1V临床效益的适当方法除许可需求外,高级开发程序生成的数据需要满足DoD性能需求

7摘要

保护国家战士和平民对保护美国至关重要战士和平民面临的威胁之一是攻击性使用生物物剂,意图杀或无能深入开发抗肉毒杆菌神经毒素和肺鼠疫疫苗的工作正在顺利实现在申请FDA许可前推进枢轴测试所需的性能和有效性目标

感知感知

RBVA/B和RF1V高级开发工作由化学生物医学系统联合获取方案(CBMS-JVAP)和国防部DAMD17-98-C-8024合同供资大字细胞毒性研究初始开发部分得到医学生物防御研究方案、美军医学研究与材料指令项目510047-05-RDB和1.1A0008-08RDB(USMRIID-S并依据机构间协议USAMRIID和CBMS-JVAP间A151工作计划A.18Anthors感谢rBVA/B和rF1V团队成员协助编写论文DVC确认并感谢多分包商开发制造、测试、非临床研究

论者的意见、解释、结论和建议不反映军部、国防部或美国政府的官方政策或立场