巫术血清提取物对抗禽病毒的抑制活性GydF4y2Ba - 188bet体育t,188bet投注网站,188d博金宝官网

抽象的GydF4y2Ba

本研究旨在筛选抑菌活性GydF4y2Ba米兰米兰GydF4y2Ba鸡呼肠病毒、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、新城疫病毒(NDV)和传染性喉气管炎病毒(ILTV)的提取物。采用MTT法测定无水甲醇(100MOH)、50%甲醇(50MOH)和水提液(WA.) 3种提取物的细胞毒性和抗病毒作用。的GydF4y2Ba米兰米兰GydF4y2Ba分别在接种前、接种后和同时接种三次接种的鸡胚成纤维细胞(CEF)中添加提取物。除100MOH和50MOH对IBDV无抑制作用外，3种提取物在同时接种和预接种过程中均对所有被测病毒均有抗病毒抑制作用，提示提取物对病毒有预防作用。接种后，提取物对NDV和禽呼肠孤病毒均有抑制作用，对IBDV无抑制作用，只有100MOH对ILTV有抑制作用。这项研究的初步结果表明GydF4y2Ba米兰米兰GydF4y2Ba可能是抗病毒药物的一种天然替代来源。GydF4y2Ba

1.介绍GydF4y2Ba

尽管在护理手段中取得了巨大的进展，使用药物和疫苗接种来控制传染病，对家禽行业仍有重大威胁。病毒是家禽疾病最大的致病药之一，被认为是家禽行业的主要风险，从而为全球家禽行业导致巨大的经济损失。疫苗接种仍然是打击家禽疾病感染的重要策略。然而，尽管对这些疾病疫苗接种，但由于抗病毒化合物的毒性和高成本，抗病毒剂不用于家禽疾病时，感染性疾病发生。GydF4y2Ba1GydF4y2Ba那GydF4y2Ba2GydF4y2Ba］．因此，有必要寻找其他方法来控制病毒性疾病。GydF4y2Ba

目前，人们越来越重视寻找新的有效和安全的化合物来控制人和动物的病毒性疾病。我们进行了多项调查，以测试不同的植物提取物对流感病毒(H1N1)的抑制作用[GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba]，新城疫病毒[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba),轮状病毒(GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba和1型单纯疱疹病毒[GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba］．对草药及其提取物等自然资源进行了调查的生物学作用，使其成为控制这种疾病的令人鼓舞的研究前景。八角茴香（GydF4y2Ba米兰米兰GydF4y2Ba）代表一种药草之一，特别是在它作为抗菌药物的普及之后。从八角茴香的果实中萃取shikimic acid用于生产Tamiflu的生产[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba米兰米兰GydF4y2Ba八角是一种常绿植物，通常被认为是中国的八角，它有星形的果实，起源于中国和越南，传统上作为香料和草药。此外，它还具有药用特性，对健康有显著的好处[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba];恒星茴香提取物向人类免疫缺陷病毒（HIV）显示抗病毒活性[GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba]，单纯疱疹病毒类型1（HSV-1）[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba]、2型单纯疱疹病毒(HSV-2) [GydF4y2Ba11GydF4y2Ba和牛疱疹病毒1型(BHV-1) [GydF4y2Ba12GydF4y2Ba］．然而，关于其对抗禽流感病毒活动的现有数据有限。本研究旨在评价三种提取物的抗病毒活性GydF4y2Ba米兰米兰GydF4y2Ba对抗四种禽流感病毒GydF4y2Ba

2.材料和方法GydF4y2Ba

2.1。植物GydF4y2Ba

米兰米兰GydF4y2Ba干果购自沙特阿拉伯利雅得的当地草本店。八角茴香的干果被研磨成细粉末。GydF4y2Ba

２.２.八角茴香提取物的制备GydF4y2Ba

采用无水甲醇、50%甲醇和无菌蒸馏水三种溶剂对八角茴香进行提取。每个提取物分别加入100 g八角茴香粉到500ml的相应溶剂中，在密封的烧瓶中充分混合，然后在37℃的水浴中间歇振荡24小时。收集上清液并过滤(Whatman滤纸编号。1)将残渣保存在烧瓶中，重复提取3-5次，直到得到澄清溶液。之后，提取液被收集并再次过滤(Whatman no。1).将提取液放入45°C的烤箱中烘干。将干提取物称量，然后将其稀释至500 mg/ml的最终浓度，或者将其放入有盖子的瓶子中，放在冰箱中备用。将稀释后的提取物离心，0.22过滤GydF4y2Baμ.GydF4y2Bam微孔膜过滤器(Whatman, Kent, UK)。GydF4y2Ba

2.3。细胞和病毒GydF4y2Ba

在本研究中使用了鸡胚成纤维细胞（CEF），并且细胞由9-至11天胚胎雏鸡制备。本研究中使用病毒疫苗菌株，禽血清菌株，禽节炎患者（S1133），NDV（克隆30），IBDV（D78）和ILTV（奥马哈NE68103 USA），用于评估中国人的抗病毒品作用八角提取物。GydF4y2Ba

2.4。鸡胚胚胎细胞培养的制备GydF4y2Ba

在先前描述的标准方案之后，从9-至10天雏鸡胚组织了CEF细胞[GydF4y2Ba13GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

2．5．传播的病毒GydF4y2Ba

CEF Monolayers在补充有10％新生胎儿血清的M199培养基中，并在37℃下孵育5％COGydF4y2Ba_2GydF4y2Ba．获得融合的CEF单层膜后，用胰蛋白酶/EDTA溶液传代。当新的CEF在T75烧瓶(康宁)中生长至85%合流时，去除生长培养基，将每个病毒悬浮液1 ml接种到组织培养烧瓶中;接种瓶37℃孵育1小时，使病毒吸附。去除病毒悬液，加入添加5%新生牛血清的M199，接种后的细胞在37℃和5% CO下孵育GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba使用倒置光学显微镜（日本尼康），每天为细胞病变效果（CPE）进行七天。病毒被传代五次以确保采用CEF。根据簧片和麦芽的方法进行病毒滴定[GydF4y2Ba14GydF4y2Ba］．GydF4y2Ba

2.6。细胞毒性测定GydF4y2Ba

细胞毒性的GydF4y2Ba米兰米兰GydF4y2Ba使用称为MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴铵）方法的细胞活力测定法在体外评价萃取液[GydF4y2Ba15GydF4y2Ba］．96孔组织培养板中融合单层CEF细胞，用不同浓度的GydF4y2Ba米兰米兰GydF4y2Ba用M199培养基稀释的提取物（250-0.48mg / ml）并在37℃下用5％CO温育GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba；没有提取物的细胞作为对照施用。孵化72小时后，20 μ.GydF4y2Ba每孔加入MTT溶液(5 mg/ml PBS) (Sigma)， 37℃孵育4小时，取出培养液100GydF4y2Baμ.GydF4y2Ba将L的二甲基砜（DMSO）加入到每个孔中。将板在微孔板振荡器中摇动5分钟，使用微孔板读卡器在570nm的波长下读取吸光度。实验一式两份进行并重复三次。GydF4y2Ba

2.7。感染和病毒生长试验GydF4y2Ba

通过对CEF细胞中CPE病毒的抑制能力来评价其抗病毒活性。根据细胞毒性试验结果，从M199最大无细胞毒性浓度(3.9 ~ 0.24 mg/ml)开始，将提取物稀释至不同浓度。抗病毒活性GydF4y2Ba米兰米兰GydF4y2Ba采用Fan et al. [GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba]和徐等人。[GydF4y2Ba16GydF4y2Ba］．在第一种方法中，同时接种，100个TCIDGydF4y2Ba_50.GydF4y2Ba病毒悬浮液与GydF4y2Ba米兰米兰GydF4y2Ba在4℃下将细胞培养物外提取1小时，然后将处理的病毒加入细胞培养物中，并在37℃下温育1小时。之后，除去病毒悬浮液，将细胞用PBS洗涤，并将新的M199加入到平板中，并将所有板在37℃下用5％CO孵育。GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba；阳性对照孔含有不含提取物的细胞和病毒，阴性对照孔只含有培养基中的细胞，空白孔只含有培养基。每天用倒置光学显微镜检查细胞。在预接种法中GydF4y2Ba米兰米兰GydF4y2Ba将提取物与CEF细胞一起在37℃和5％CO中孵育2小时GydF4y2Ba_2GydF4y2Ba然后除去萃取液，用PBS洗涤处理的细胞，然后用100℃洗涤GydF4y2Ba_50.GydF4y2Ba将病毒悬浮液与处理过的细胞孵育1小时。之后，除去病毒悬浮液，将维护介质加入到板上，将板在37℃下在潮湿的气氛中孵育和5％COGydF4y2Ba_2GydF4y2Ba．然后每天检查平板用于CPE。在Postinoculation方法中，100个TCIDGydF4y2Ba_50.GydF4y2Ba将病毒与CEF单层细胞孵育在96孔板中，37℃孵育1小时，使其附着。然后，去除培养基，用PBS洗涤细胞，然后在每孔板中加入不同浓度的提取物(3.9-0.24 mg/ml)。MTT法测定CEF的存活率，当活性对照细胞显示80% CPE时进行检测。实验重复了三次。病毒抑制率计算公式为:病毒抑制率=(提取物+病毒-病毒控制)/(细胞控制-病毒控制)GydF4y2Ba 100. The absorbance values and virus inhibitory rate were considered as indicators of antiviral activity.

2.8。统计分析GydF4y2Ba

数据采用SAS®的GLM模型进行方差分析[GydF4y2Ba17GydF4y2Ba］．Duncan多距离测试用于比较治疗方式之间的差异（GydF4y2Ba ）GydF4y2Ba当重要。百分比数据在分析前进行反正弦变换。所有实验重复三次。GydF4y2Ba

3.结果与讨论GydF4y2Ba

在使用MTT的细胞毒性测定中，将细胞的吸光度值用作活细胞数量的指标，与细胞生长有关[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba，因此，高吸光度值意味着更多的活细胞。当处理后的细胞的吸光度值不显著低于细胞对照时，说明该提取物对细胞无细胞毒性，相应浓度可视为最大安全水平。细胞毒性试验结果GydF4y2Ba米兰米兰GydF4y2Ba提取物列于表中GydF4y2Ba1GydF4y2Ba．结果表明，100MOH和50MOH提取物3.9 mg/ml和WA提取物1.9 mg/ml均未明显低于细胞对照组。因此，这些浓度被认为是最大安全水平。高浓度的100MOH和50MOH提取物(62.5 ~ 7.8 mg/ml)对CEF具有毒性，其吸光度值较低。在62.5 mg/ml浓度下，水提物与细胞对照无明显差异。高吸光度值可能是由于在该浓度下(62.5 mg/ml)水提物颜色较深，但在以下浓度下(31.25 ~ 3.9 mg/ml)，吸光度值明显低于对照组。另一方面，在浓度为1.9和0.97 mg/ml时，水提物的值显著增大(GydF4y2Ba ）GydF4y2Ba比对照组可能表明该提取物可以促进这些剂量范围内的细胞生长[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba］．为便于对相同浓度的提取物进行比较，我们认为提取物的最大安全浓度为3.9 mg/ml。GydF4y2Ba


浓度（mg / ml）GydF4y2Ba	八角提取物GydF4y2Ba^1GydF4y2Ba
浓度（mg / ml）GydF4y2Ba	100年卫生部GydF4y2Ba	50卫生部GydF4y2Ba	佤邦GydF4y2Ba

62.5GydF4y2Ba	0.152GydF4y2Ba^CGydF4y2Ba	0.198GydF4y2Ba^D.GydF4y2Ba	0.379GydF4y2Ba^CGydF4y2Ba
31.25GydF4y2Ba	0.126GydF4y2Ba^D.GydF4y2Ba	0.141GydF4y2Ba^E.GydF4y2Ba	0.293GydF4y2Ba^E.GydF4y2Ba
15.62GydF4y2Ba	0.108GydF4y2Ba^D.GydF4y2Ba	0.124GydF4y2Ba^E.GydF4y2Ba	0.247GydF4y2Ba^FGydF4y2Ba
7.8GydF4y2Ba	0.116GydF4y2Ba^D.GydF4y2Ba	0.258GydF4y2Ba^CGydF4y2Ba	0.127GydF4y2Ba^GGydF4y2Ba
3．9GydF4y2Ba	0.390GydF4y2Ba^{一种GydF4y2Ba}	0.361GydF4y2Ba^{一种GydF4y2Ba}	0.324GydF4y2Ba^D.GydF4y2Ba
1．9GydF4y2Ba	0.382GydF4y2Ba^{一种GydF4y2Ba}	0.324GydF4y2Ba^B.GydF4y2Ba	0.458GydF4y2Ba^{一种GydF4y2Ba}
0.97GydF4y2Ba	0.389GydF4y2Ba^{一种GydF4y2Ba}	0.327GydF4y2Ba^B.GydF4y2Ba	0.410GydF4y2Ba^B.GydF4y2Ba
0.48GydF4y2Ba	0.353GydF4y2Ba^B.GydF4y2Ba	0.307GydF4y2Ba^B.GydF4y2Ba	0.373GydF4y2Ba^CGydF4y2Ba
单元控制GydF4y2Ba	0.402GydF4y2Ba^{一种GydF4y2Ba}	0.380GydF4y2Ba^{一种GydF4y2Ba}	0.395GydF4y2Ba^{公元前GydF4y2Ba}
SEM.GydF4y2Ba	0.007GydF4y2Ba	0.009GydF4y2Ba	0.009GydF4y2Ba
价值GydF4y2Ba	<0.0001.GydF4y2Ba	<0.0001.GydF4y2Ba	<0.0001.GydF4y2Ba