抽象性
导 言.急性时态肝功能失灵(ACLF)是肝移植病人的急性反填法,导致器官机能失灵和短期高死亡率处理基础是复杂症管理,重症移植肝脏无法提供特殊治疗,因此,我们旨在评价ACCF二级和三级病人骨髓线粒干细胞(BM-MSC)的安全和初始效率,ACCF二级和三级病人被排除在以前的临床试验之外。方法论.随机安卓控制I-II单中心研究 2018-2020年注册9名肝科病人控制组N级=5经标准医疗处理和安慰剂注入盐碱干预集团N级4+5注入6细胞/kgBM-MSC3周两组监控90天奇平方测试用于质变t级测试和曼-惠特尼U级测试量化变量kaplan-Meier估计器用于构建生存曲线在这次研究中,我们跟踪意图处理分析,意义为5%结果.九位病人平均Child-Pugh(CP)12.3,MELD38.4和CLIF-C分50.7乙型肝炎和酒精为主理学平均向每名病人注入2.9个,只有3个病人(2个控制区和1个BM-MSC组)接收所有协议注入并不存在注入相关副作用,尽管干预组中有一名病人分别在第三注入和第五注入后提交超纳特里米亚和胃溃素90天后存活率对安慰剂为20%(1/5)对BM-MSC为25%(1/4)。完成全MSC协议的病人显示CP(C-14-B-9)、MELD(32-22)和ACLF(3-0级)大有改善结论.BM-MSC注入对ACLF二级和三级病人安全可行
开工导 言
急性时态肝功能失灵(ACLF)是慢性肝病患者综合症,特征为急性反补偿、器官功能失灵和高短期死亡率[一号..自2002年首次定义ACLF2数例尝试提出更好的定义诊断标准3-6..然而,使用的方法不适当,导致缺乏共识。
未来多中心观察研究CANONIC实验发布后,2013年有可能以更详细和精确的方式定义综合症。诊断标准在这些组应用新评分系统,即慢活机故障序列评分提高诊断标准标准化[CLIF-SOFA7..
ACLF特征描述诊断虽有进展,但其管理仍然有限,这解释了短期高死亡率的原因当前,治疗替代方法包括可行时处理底层病理学,控制触发因素,支持机体失效的措施遇临床变质时,肝移植可选用8,九九..然而,由于缺少捐赠者、器官失效严重性以及无用风险,LT仅限于少数案例
在这方面,还研究过其他策略,包括体外肝支持系统10,11免疫元处理法,如粒子聚变因子12,13和排泄物微生物移植14..最有希望的处理方法之一是使用中枢干细胞,显示该干细胞有防炎效果,同时减少肝细胞损害15splate手机激活16..少数试验显示从使用中得益17-20码并鉴于其在ACLF的作用仍然不确定,缺乏有效处理导致人们更加兴趣深入探索MSC治疗条件
研究的目的是评价ACCLF病人骨髓敏捷干细胞输血的安全和最终效果
二叉方法论
2.1.研究设计、标准与道德问题
自2018年9月至2020年1月,目的是评价异质骨髓干细胞注入ACLF2级和3级病人的安全性和效率
ACLF定义使用7由大蚂蚁、脑病理学、胃肠出血学、细菌感染或任何组合等条件引起的肝脏急性反补偿住院包容标准还要求 (a) 满足ACLF诊断标准以及ACLF二级或三级和(b)年龄介于18至70岁之间排除标准是(a) 病人或家属拒绝肝细胞癌正式肝移植抗体(如先进心或肺病)d) 怀孕哺乳前肝移植艾滋病毒并发ACLF一级入院选择程序内核慢性病需要透析
研究协议得到了阿雷格里医院伦理委员会(注册号:92330718.0.000327)和巴西临床测试注册局(注册号:RBR-8n8csf)的批准。
2.2.随机化掩码
测试开始前人工随机化预设哪个病人会接收BM-MSC或abo医疗队帮助病人和病人不知道分派组
2.3病人程序
九名病人符合条件,病人或家属在病人无法签名时签名知情同意一名经过培训并经过认证的医生负责面谈并收集知情同意资料,并负责从电子医疗记录中收集临床和生化数据。之后,向病人分配标准医疗,配有异源骨髓偏移干细胞或SMT加安慰
干预组中MSC以5IV注入1.0x106细胞/kg,2周一周两次,第三周一服安慰剂组在相似接收者中接收相同量的盐水
生命标志和临床状态记录 紧接注入结束后最长1小时所有可能的负反应(如拉皮、发热和血压变化)每30分钟记录一次注入后一天,对临床状态和可能的不良反应(如腹泻)重新进行评估实验室测试与评价Child-Pugh(CP)、端生病模型(MELD)、MELD-Na和CLIF-SOFA评分一起在第一次注入前和处理后28天和90天完成
2.4.异式BM-MSCs
线性干细胞移植用法Alegre医院骨髓捐献者从包过滤器中获取,经签名后用于脑电图干细胞移植此类程序对这种移植没有影响,先前研究显示有可能获取这些细胞以进行细胞理疗,优势在于这些材料汇总骨髓解析数据[21号..
2.4.1MSC培植
赫马托语干细胞移植中用作MSC种植源的包过滤器在移植后不久发往Clinicas医院高级细胞处理中心取出细胞的方法是清除滤波并用盐水打包离散后细胞计数Neubauer机房,可行性通过排除法验证Tripan蓝染细胞再插在文化瓶中,密度为30万个实核细胞/cm2DMEM介质中(Eagle介质由Dulbecco修改,Gibco)补充10%人类板板解析法和1%peniclin/steptocin添加抗生素抗生素文化火瓶转置为加湿5%CO2华氏37度细胞生长通过显微镜监控,当聚集约80%时,细胞用0.05%trypsin/EDTA(Invitrogen)脱包并嵌入新培养瓶子5千分位/cm2.细胞扩展至第二通道(P2),该通道保留密码并存储在-80摄氏度时等待质量控制测试
2.4.2.板牌轮播
受MSC扩展补充的病人检测到抗波音Feterem蛋白22号..人体血清通过小板解析成功使用体外研究显示LP与BFS一样有效扩展MSC22号,23号和另一项研究显示米氏干细胞扩展LP3.75比BFS高3.75倍21号..因此,从生物角度讲LP安全性强,至少与BFS对细胞扩充同样高效
2.4.3.Cryopreservation
手机内存密码包数等同1x106体积为25ml,由17.5ml单调5ml和6%HES+2.5ml二甲基二亚它们在-80摄氏度存储并隔离直到质量控制测试准备供临床使用
2.4.4.质量控制
百科全书.细胞通过流细胞测量分析FACSCantoII细胞计(BD生物科学计)CTMs必须表示标记DC73、DC90和DC105,对DC14、DC34、DC19、HLADR和DC45必须是负24码..捕获细胞按1x10集中度调整6/mlPBS和100华府单克隆抗体在室温下注入30分钟并保护免光洗完后,细胞用4%仿冒膜固定并用流细胞计分析
数据采集分析使用FACSCantoII流细胞计上Diva软件使用点画图和直方图评价结果,用MFI测量荧光强度24码,25码..
(2) 差分测试.MSC必须有能力辨别骨电流、二元电流和铬电流在P2通道上,三行中每一行用特定商业试剂对三次小艾奎特作区分并用显微镜录入
3测试检验Mycoplasma的存在.mycoplasma的存在用商业工具箱测试(VenorGeM Mycoplasma检测包Sigma-Aldrich)。工具箱使用聚合物链反射法,即金标准,因为它在检测时敏感度更高mycoplasma细胞培养中的污染工具箱2-5单元中检测到1-5fg污染脱氧核糖核酸mycoplasma样本体积素数集特指高度节能区域,或更精确地说, Mycopsma基因组中16S RRNA编码区域允许检测全部mycoplasma迄今测试的物种通常被发现为细胞培养物中的污染物
(4)测试安多克斯.检测样本内分毒时,用敏感度为0.05-0.1EU/ml的墨盒测试EndoSeetQ-PTS(Charles River,USA)。弹盒有4通道,2正控件和2读取样本样本内分毒触发酶反应,生成黄色,通过染色分片生成基质运动细胞读取PTS-Endo安全设备
(5) 静态性.检验细胞产品中是否存在微生物,3mlaqut文化超生体接受Alegre医院微博实验室反需血液培养测试(通过自动 Bactalert系统)。
2.5播送和编译槽注入
寄存包注入病人时,取水槽37摄氏2分2分并闭合系统:15毫升Capin(20%)、3.75毫升反coaglanisa后删除aliquot计数和细胞可行性优选1x106活细胞/kg注入水中,只使用活性大于70%的包MSC静脉注射给符合列入本研究条件的病人
2.6MSC注入
目标5注入MSC边缘静脉,剂量为1x1063周内细胞/kg数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组二组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组二组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组数组MSC系统装入转移包中使用设备并配有最小长度为10至20分钟的大型聚合保留滤波整个过程和注入结束60分钟后,生命信号记录为每30分钟记录一次并记录出输出响应和病人临床演化
2.7结果
初级结果为不良事件发生率和注入后生存二级结果为肝移植率和CP、MELD、MELD-Na和CLIF-SOFA分数变化
肝功能评估 通过bilrubin,prombin时间和相册水平 和煽动阶段 通过leukocytes和C-反应蛋白
2.8样本大小统计分析
少有分析BM-MSC使用的研究, 我们定义方便样本9名病人, 4名干预组和5名安慰类
量化变量显示均值和标准偏差,定性变量显示绝对频次后取表示总值的百分比N级百分数
组比较时对质变量使用千方测试t级测试量化变量,当异常时 Mann-WhitneyU级测试kaplan-Meier估计曲线估计生存率使用日志排序测试比较曲线即用软件R3.6.0完成的意向对处理分析测试测值为5%
3级结果
3.1.基点人和通用特征
9个学习参与者中,4个接收BM-MSC两种组间基准临床和生化剖面没有显著差别(表)。一号并2)平均年龄54.4岁,66.7%为男性三分之二的病人有酒精和丙型肝炎作为肝硬化学,而ACLF开发的主要原因是感染(44.4%)平均分数为CP12.3(SD++1.2)、MELD38.4(SD++7.3)、ACLF等级2.3(SD++++5)和CLIF-C50.7(SD+++10.9)。六位病人在学习协议结束之前死亡(3位安波组和3位干预组)。
3.2安全性
注入后1小时内没有观察到不良事件最重要的不良事件有高逆差(162mEq/L)和胃肠出血,结果胃溃疡,分别在第三剂和第五剂后观察到。两位负响应都来自MSC组同一位病人,与MSC注入无关。
3cm3有效性
所有病人平均注入数为2.9,中值2,最少注入1并最多注入5仅有3名病人根据研究协议接受了所有5剂,2名安眠药组和1名干预组
中值生存时间32天,标准偏差47.4天90天后存活率为安慰剂组20%(1/5)和MSC组25%(1/4)(图解)一号)后续的第28天有6名病人死亡,3名活人中2名来自安慰剂集团注入后90天,2名病人活口(安波和MSC分组各1名和1名)。没有一个病人在研究期间接受肝移植
并分析肝脏和炎症实验室测试 从海安斯首服前3天持续到注入后7天干预组略微减二联苯并微增二联苯和二联苯并小增二联苯特性,安波组未见特征关于炎症特征、C反应式蛋白质和leukocytes,分组间没有差别(图解)。2)
(a)
(b)
(c)
d)
e)
关于那些直到协议结束生存的病人,MSC的病人肝功能有明显的改善(Fuare图)。3中未观察到
(a)
(b)
4级讨论
鉴于ACLF没有经批准的具体治疗方法,我们的研究旨在评价BM-MSC注入ACF二级和三级病人的安全性和效率虽然我们已经证明MSC在这部分人群中的安全性,但MSC和安非他明组间90天生存率相似至目前为止,这是MSC首例重度ACLF测试 和第一批注册肝病患者
不同于使用亚太Liver研究协会定义ACLF标准评价ACF17-20码sl-CLIF使用不同的标准,因为有越来越多的证据表明它能更好定义ACLF26-28码..这使得比较数据 前研究略为复杂除注册使用标准外,ACLF和Ors前多功能细胞注入协议之间还有其他许多差异首先是只包括染乙型肝炎(HBV)的病人况且,并非全然曲解诚然,这些研究可能包括带HBV信号的慢性肝炎患者,因为他们高alanine反射线值和高病毒载荷因此,总结果不单来自MSC使用,还来自MSC和反病毒协会此外,MSC源协议和注解协议在本研究中用法不同。多数研究管理MC脉冲17,19号,20码..Lin等[18号并用不同的协议处理BM-MSC病人(1周注入4周)。研究组研究MSC29-32码特别是急性移植主机疾病三十三,34号并有良好结果基于前文研究, 我们假设相似协议 可能改变ACLF进程本项研究与前项研究之间的另一个显著差别是病人肝病的严重程度。并包括非循环性病人、某些排他性标准,如动脉出血历史、最近感染和严重肾衰竭[17表示病人状况优于本研究所包括者所有的病人都出故障 随机化时 重症护理单元 ACLF管理6名病人有ACLF二级和3名病人有ACLF三级高CP、MELD和CLIF-C分数,证明受影响人口比先前估计严重得多
BM-MSC注入安全性,无重大副作用,与以往研究相似17-20码..5名病人在随机化过程4天后死亡(同一天注册,另外1名病人随机化后一天死亡,两者均来自安慰剂集团)。3名患者在干预组死亡(所有3人只接受两剂BM-MSC),但没有显示临床状态或实验室测试的改善
从实验室数据看,我们从头三天注入到第七天密切检查病人,以便检查MSC对肝功能和系统炎症响应的急性作用总的来说,与安慰剂组相比,MSC组肝功能略有改善。另一方面,我们未能显示炎症有任何改善这一点很重要,因为CANONIC审判7显示ACCLF患者情境恶化
安全评价方面,这项研究显示MSC注入安全性,与前几次报告试验相比[17-20码不论其源码(骨髓或直系)、剂量或注入点仅有两种副作用(高抗冲和胃溃素)被推定不与处理相关联,因为每次注入量低不会引起高抗冲,开发MSC胃溃素缺乏可行性。
关键是要强调干预组唯一接收全预设协议五MSC注入的病人显示第四服后有改善,肝功能大恢复ACFL也得到了解决,使他能在学习协议结束一周后卸载,图中显示3.虽然本研究无权得出死亡率结论,但本研究中可能降低BM-MSC注入益度的方面与下列缺陷相关:(a) 低注册病人数显示极端重病的病人(ACLF二级和三级),平均MELD38并因高提前死亡而未完成注入协议可能启动MSC治疗为时过晚(系统煽动响应已经建立),从而阻塞子细胞效果,正如其他一些作者所建议35码-37号..
最后,我们评价新协议注入BM-MSC并展示ACCF高等级肝脏安全性一种案例肝功能有明显改善,建议可以进一步探索MSC理疗方法,也许可以以不太严重的ACLF形式进行,如ACLF1和更多病人组
数据可用性
支持本研究发现的数据可应请求从相关作者处获取。
利益冲突
作者声明他们没有利益冲突
作者贡献
FCS和MRAS负责研究的构思和设计所有作者都负责获取和分析数据此外,FCS和MRAS负责统计分析FCS和MRAS起草手稿所有作者修改并评论草稿并核准手稿最终版