抽象性

安非他明广泛用于预防和治疗动物疾病昆虫残留物积聚家畜和家禽并伤害消费者假设固相提取和超高性能液相图质谱测量同时判定猪肉、牛肉、羊肉、鸡鸡及其产品中的安非他明和代谢物并满足政府最大残留限值规则乙酸乙酯和氨水提取粗样本98:2 v/v,用CNWSISE柱净化样本N级赫克斯坦语并用UHPLC-MS/MS测定结果解析动物和家禽肉解析器检测限值为0.03-1.50华府g/kg量化限值为0.05-5.00华府g/kg测量的氯苯酚、二苯酚和florfenicol浓度线性范围为0.50-50华府g/kgFlorfenicol放射性浓度线性范围为5.00-200华府g/kg(均相关系数>0.9990采样回收率介于72%至120%之间日间相对标准偏差介于1%至9%之间,日间SD介于1%至12%之间基于上述结果,当前方法敏感、准确并可复制,检测限值远低于中国标准G31650-2019的最大残留限值,因此可确认我们的研究假设

开工导 言

中国生产并消费大量牛鸡肉相应的质量和安全问题损害消费者健康并设置进出口贸易壁垒一号..在这些质量和安全问题中,兽药残留物特别相关氯仿col(CAP)、thiemphenicol(TAP)和florfenicol(FF)这些物质广度抗菌性能、低成本和高能2-4..CAP对人类心电图系统剧毒并可产生副作用,如单片性贫血[5,6..CAP衍生工具TAP替换第2段-nitroCAP配甲烷单片组,毒性小于CAP,但可抑制红细胞、白细胞和小板的生产7,8..FF从TAP合成用氟取代3-Hycros群动物专用appenicol并比CAP和TAP高抗菌活动九九,10..FF通过处理动物生物反转路径代谢fernicolaa一号)[11..因此,为调控有毒安非他明的使用并减少其在家禽和家禽产品中的流行程度,安非他明的使用受法律法规严格限制。目前,中国、美国、欧洲联盟、日本和其他国家禁止使用CAP动物饲料表显示一号中国、美国和欧洲联盟规定TAP最大残留限值为50类动物衍生食物,如肌肉、脂肪、肝脏、肾脏和牛奶华府g/kgFFML和FFA之和在肌肉、肝脏、肾脏、皮肤和脂肪中为100-3700华府g/kg12-17..TAP不推荐供人生产鸡蛋的动物,FF不推荐供中国和欧盟供人生产牛奶和鸡蛋的动物


图1
aphenicls化学结构与FF代谢路径
表1
MRL比较中国、美欧

文献中提供各种方法确定动物衍生食物中的安非他明并应用检测系统,如生物传感器18号-21号syme关联免疫机能解析22号,23号高性能液相色谱24码-26液色谱质谱法27号-30码气相色谱学31号和GC-MS/MS32码,三十三..其中包括LC-MS/MS是appenicls主要的检测和确认法超性能液相色谱-MS/MS技术比传统LC-MS/MS更适合分析和检测amphenicls目前报告了若干分析方法分析一些aphenicols和代谢物28码,30码,34号,35码..此外,这些方法通常为一或二矩阵开发[7,36号,37号..据我们所知,很少有报告同时检测动物衍生食物中全家族安非他明和代谢物研究中,我们将固相提取法与UUHPLC电磁分解模式/MS并用正对式同时测定CAP、TAP、FF和FFA猪肉、牛肉、羊排、鸡和产品最优实验条件我们的目标是促进动物衍生食品国际贸易的发展,为质量安全监控提供参考,并规范动物衍生食品监管测试方法

二叉材料方法

2.1.化学试剂

CAP、TAP、FFFA和CAPD5标准从Dr.Ehrestorfer GmbH (Augsburg, 德国)FFA-D3标准取自多伦多研究化学HPLC级乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙型乙N级Hexane由Merck提供(德国达姆施塔特市)。氢氧化铵级试剂、HPLC级丙酮和丙酸由Sinopharm化学试剂公司提供上海市水用arium Pro超纯净水系统净化(Sartorius,Gottingen,德国)。

2.2.标准库存和工作解决方案准备

CAP、TAP、FF、FFA、CAP-D5和FFA-D3标准储量解决办法编译华府g/ml解析甲醇以上所有标准存储方式存储于-20摄氏度达6微米

CAP、TAP、FF和FFA混合标准工作解决方案集中度为10华府g/ml用甲醇稀释标准存储法内部标准工作解决方案集中度1.0华府g/ml用甲醇稀释内部标准存储法标准工作解决方案存储于-20摄氏3度

2.3UHPLC系统/MS仪表和操作条件

热科学范奎什超高性能液相色谱并用热科学TSQQuantis质谱仪分离使用WatersquityUPLC高强度SilicaC18列(50毫米x2.1毫米,1.8华府m!waters, Milford,MA,USA)前端连接Waterscity UPLC HSSC18VanGuard前列华府m!华特斯市米福德市ma列温度为40摄氏度,样本注入量为2.0华府L.梯度分解用水和ACN移动相位执行,流速0.3ml/min:0-4m4-6分钟96%6-10分钟96%vv

MS/MS配有ESI源操作正离子化模式、负离子化模式和选择响应监控模式CAP、TAP、FF和CAPD5用NI模式分析,FFA和FFAD3用PI模式分析ESI源使用下列毛线电压操作:3.5kVPI模式和2.5kVNI模式堆积气: 50arb辅助油气: 10arb离子传输管温度325摄氏度蒸发温度:350摄氏度

2.4.样本准备

验证程序所用空白样本取自肉品质量监督检验中心(中国南京)。猪排、牛排、羊排和鸡块被智能同质器(Lab精化北京技术公司,LTD北京市,中国)10 000r/min拆分和5.0g重置50ml聚丙基离心管样本加注华府内部标准工作解法L匹配2华府g/kg组织内CAP-D5和FFA-D3后加15毫升乙酸乙酯2%(v/v)氨混合式使用IKAVortex3完全同化(IKA,Steufen,德国)。混合后,同质离心机为10,621g4摄氏5分,超导体转入50毫升聚丙烯管提取步骤重复使用加15毫升乙酸乙酯和2%(v/v)氨,在相同条件下摇动并再次离心机生成超生与前50毫升聚丙烯管提取合并,提取物在40摄氏度时蒸发干2.5H

剩余解析法用acetone/N级赫克斯内(1:9,v/v5mL加载CWSISPE(200mg)墨盒N级赫克斯内(1:9,v/v5mL)弹盒用acetone/N级赫克萨斯州6:4v5ml),后用液蒸发为40摄氏度干10分剩余解析法通过添加1.0mlACN-waterv/v)并转动一分钟5毫升六相饱和纯ACN离心10,621g后1分后,六元层被丢弃退步重复两次归根结底层1毫升方程通过0.22倾注华府m过滤器插进自动机小瓶华府液瓶L使用UUPLC-MS/MS分析

3级方法验证

3.1.确定线性、检测限制和安非他明量化限制

矩阵匹配标准求解序列集编译用空矩阵提取法稀释混合标准工作求解其中包括CAP、TAP和FF设定为0.5、1.0、5.0、10.0和50.0华府g/kg范围为0.5-50.0华府g/kg和FFA设定为5.0、10.0、50.0、100.0和20.0华府g/kg范围为5.0-2000华府g/kg(CAP-D5和FFA-D3浓度为10华府g/L)标准曲线使用appenicols质量集中构建华府g/kg)absissaX级分析/内部标准峰值比y市方形相关系数R2)计算结果

负牛和家禽肉加进内部标准工作解法和混合标准工作解法并参照上述方法检测检测限值为信号对噪比3时最小增加集中度,量化限值为最小增加集中度38号..

3.2恢复精度测试

爬进牲畜和家禽肉的解决方案如下:CAP标准工作解决方案、TAP和FF三级集中化(1、5和10)华府g/kk)和FFA标准工作解法三级(5、10和50)华府g/kg)预处理按上文所述方法进行,每种富集度设置为六度并行回收计算如下: 去哪儿C级E级实验集中取标曲线C级M级峰值集中精度通过计算相对标准偏差确定高压富集度三级样本在同一天连续六天测量,然后计算日内SD和日间SDRSD计算如下: SD标准偏差C级A级平均实验浓度从标定曲线测定

3cm3家畜肉类、家禽肉类及其产品应用

28个实品样本 商业牛肉 家禽肉 和来自中国各地的产品 用于检测apheniclsAppenicls提取样本前述,并用UHPLC-MS/MS分析提取

3.4.数据分析

TraceFinder4.1软件(ExcessScience,Waltham,MA,USA)用于数据采集处理,原创8.0软件(Microlical软件公司,Northampton,MA,USA)用于绘图

4级结果与讨论

4.1.UUPLC-MS条件优化

叉酸用法改进响应和峰值形状与FA相对应,但生成离子抑制CAP、TAP和FF-我们用NI模式监听28码..微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信微信四种目标复合物分离效果极佳,当ACN-water为移动相位时(图解)2)FFA峰值在移动相后添加叉酸后变成双模式因此,我们选择ACN水移动相位分离四种解析


图2
CAP、TAP、FF、FFA、CAP-D5和FFA-D3表10 华府g/l带ACN水移动相CAP氯苯化物FF,florfenicolFFA,flenicolamineTAP Thiamphenicol

直接注入华府g/mlCAP、TAP、FF、FFA、CAP-D5和FFA-D注入质谱计20华府L/min和全扫描Q1同时扫描ESI(+)和ESI(-)以确定每种复合物的先兆离子SIMQ3仪表扫描每种复合物优化二对特征离子配对,最大响应量和定性离子配对优化离散电压 和相撞电量这样做时,我们获取对应质谱参数2)

表2
质谱条件和相对强度范围
4.2优化样本准备

提取溶解剂ACN显示CAP恢复得令人满意然而,当方法中引入其他解析法时,有必要选择提取溶剂,为所有解析法提供更好的回收率,而不仅仅是CAP溶性选用乙乙酸乙酯,它能促进提取所有解析物此外,氢氧化铵作添加剂可促进碱环境,有利于提取FFA计及所有appenicols和代谢物的提取效率,有必要选择能为所有解析物提供更好恢复的提取溶剂因此,我们选择下列提取法比较:i)方法A:乙乙酸乙:氢氧化铵98:2v二)方法B:ACN:氢氧化铵98:2v三)方法C:a四)方法D:乙乙酸乙:氢氧化铵49:492v/v第五大类方法E:乙乙酸乙:氢氧化铵98:2v和ACN:氢氧化铵98:2v

A方法提取后,四家畜和家禽肉制品中安非他明和代谢物恢复率都介于60%至120%之间(表解表)。3)因此,我们选择方法A为最优提取法

表3
复元和代谢物使用各种提取法

牲畜和家禽肉含有大量脂肪和蛋白质并复杂矩阵,样本提取后需要进一步净化超Sep保留PEP(60 mg/3m热渔科,Waltham,MA,USA,OasisHLB(200 mg/6mwaters, Milford,MA,USA)和CNWsiSPE(60 mg/3mANPEL实验技术公司,中国上海净化CNWSISPE柱子后,四家畜和家禽肉制品中的安非他明和代谢物恢复率介于60%至120%之间(表表)。4)因此,我们选择CWSISPE列为最优净化法

表4
复元和代谢物使用各种净化法
4.3标准曲线线性、LOD和LOQ

CAP-D5内部标准和FFFFA-D3为FAFA内部标准四类牛和家禽肉法线性范围为0.5-50.0华府g/kgCAP、TAP和FF和5.0-2.0华府g/kgFA上头R2大于0.999LOD和LOQ四种测试复合物范围介于0.03至1.50华府g/kg和0.11-5.0华府g/kg四种家畜和家禽肉类5)对比其他文献报告27号,28码,38号快速高灵敏度并满足中国食品师用最大残留限量国家食品安全标准(G31650-2019)的要求

表5
线性标准曲线 R 2LOD和LOQ家畜和家禽肉中的aphenicols和代谢物
4.4.4Appenicls和Metapolites恢复精度

验证方法恢复精度时,我们按1.0至1.0范围内三种富集率悬浮空样本华府g/kgCAP、TAPF和5.0-50.0华府g/kgFAN级=6级)表26汇总恢复精度实验结果家禽肉样本中四种解析平均恢复率为71.77%至120.30%,日间RSD <9.22%和日间RSD <12.30%方法高恢复精度并同时检测牛和家禽肉中的aphenicols和代谢物

表6
恢复并精度aphenicols和代谢物 N级=6
4.5实样本分析

我们选择了28种商业牛肉、家禽肉和它们的产品来验证我们方法的实际应用使用阳性肉样本作为质量控制样本我们检测到1.38华府g/kg新鸡禁兽药CAP0.35华府g/kg猪排香肠和0.54华府g/kg猪肉鸡巴(青岛山东),但没有样本超过MRL300华府g/kg对sprcine肌肉表27)

表7
商业牛肉、家禽肉和产品测试结果

5级结论

安非他明广泛用于畜禽养殖和生产,但可能出现非法或不达标使用这使aphenicol残留物积聚在动物和家禽体内积聚对牲畜和家禽食品安全以及人体健康构成威胁。因此,我们开发出一种检测方法,检测牛肉、家禽肉和产品中的安非他明和代谢物通过优化MS、LC和样本预处理条件,我们建立了UHPLC-MS检测法,该方法可同时检测牛肉、家禽肉及其产品中的联苯和代谢物峰值解析器5分钟内LOD为0.03-1.50华府g/kgLOQ为 0.05-5.00华府g/kg低度、中度和高密度采样回收71.77%至120.30%日间RSD <9.22%,日间RSD<12.30%方法分析时间短 敏感度高 重复性强因此,我们提供科学支持和技术保证,可靠检测动物衍生食品中的aphenicols和代谢物,促进食品安全监控

数据可用性

原始数据支持本研究的结果,可应请求从相关作者处获取。

利益冲突

作者声明,本研究的出版不存在利益冲突问题。

感知感知

作者感谢清琴LQQQ/MS分析的宝贵建议这项研究得到中国关键研发方案赠款(2018YFC1602804)和科技创新国际合作政府间特别项目(2019YFE010380)的资助