组氨酸富蛋白2 (HRP-2)、疟疾快速诊断试验和基于显微镜的疟疾诊断技术之间的诊断性能

摘要

在卢旺达等大多数热带国家，疟疾是一项诊断挑战。显微镜仍然是诊断疟疾的黄金标准，但它是劳动密集型的，取决于检查人员的技能。疟疾快速诊断测试(RDTs)已经发展成为显微镜检查的一种简单、方便的替代方法。这项横断面研究是在卢旺达东部省卡永扎区鲁卡拉保健中心进行的。从21日起，150名疑似疟疾患者到鲁卡拉保健中心就诊^英石2018年6月30日，被列入了这项研究。HRP-2 RDT（Carestart™Malaria Hrp-2（Access Bio，Inc.，Somerset，New Jerset，美国）进行了疟疾。制备厚厚的涂片，并根据推荐的Giemsa染色;然后在显微镜下观察到载玻片并定量报道;报告的RDT是定性的（正面或负面）。RDT和厚涂片结果都记录在数据收集表上。本研究包括共有150名研究参与者，87名（58％）女性和63名（42％）的男性。该研究中包括的患者没有接受任何抗疟疾药物。研究参与者的平均年龄是31.6±12.4，大多数参与者在25至44岁之间，少数民族超过65岁。计算RDT（HRP-2）的敏感性，发现均为95.0％，而Giemsa显微镜的敏感度为100％。 The specificity of RDT (HRP-2) was calculated and found to be 59.2%, whereas the specificity of Giemsa microscopy was 100%. Negative and positive predictive values of RDT are 85.4% and 82.7%, respectively. Negative and positive predictive values of Giemsa microscopy were both 100%. According to the results of the current study, the sensitivity, specificity, and both positive and negative predictive values of Giemsa microscopy are higher than those of histidine-rich protein 2-based rapid diagnostic test for malaria. The results obtained in histidine-rich protein 2-based rapid diagnostic test for malaria parasites should be confirmed with tests with high specificity. Further studies should determine the most appropriate type of rapid diagnostic test of malaria diagnosis to be used in combination with Giemsa microscopy. In addition, sensitivity and specificity of RDT (HRP-2) and Giemsa microscopy should be assessed against molecular biology techniques.

1.介绍

1.1。研究的背景

疟疾是影响大多数热带国家，特别是非洲国家的最致命疾病之一。它影响着全世界5亿多人，每年有100多万儿童死于疟疾[1］．所有人类疟疾寄生虫，恶性疟原虫（恶性疟原虫）是最致病性的，如果在时间未经处理的情况下经常致命[2］．门诊病人的传统做法是根据发烧史推定为疟疾，但很大一部分接受治疗的人可能没有寄生虫(在许多情况下超过50%)，因此浪费了大量药物[3.］．今天旧的临床实践仍然有关，特别是在获得确认实验室诊断的时间可能导致致命的时间。

迄今为止推荐的世卫组织，寄生虫的诊断应在所有疑似疟疾病例中使用，并且在患有高流行区域和某些其他情况下的儿童可能除外[1］．对于这项建议，应建立明显，快速，准确的实验室发现或疟疾寄生虫的演示。然而，寄生虫的传统微观鉴定方法不仅令人生畏，而且耗时，还耗时，需要大量的专业知识/培训。因此，非洲的显微镜通常仅限于较大的诊所/三级中心。然而，这种外周血涂片/显微镜的常规染色仍然是疟疾实验室诊断中的金标题[4.］．

rdt在市场上可以买到带有所有必要试剂的试剂盒形式，而且该程序的易用性不需要大量的培训或设备来执行或解释结果，结果在12-15分钟内读取。RDTs主要有两种形式。一种是基于抗原的，通常需要使用溶血的红细胞，而另一种是基于抗体的，通常需要使用提取的血清。一般来说，抗体在血清中表达更好，否则血浆也可以代替血清作为基于抗体的方法[5.］．该研究与Rukara Health Center诊断疟疾诊断中的两种方法，显微镜和RDT相关。

在包括卢旺达在内的大多数热带国家，疟疾是一项诊断挑战。显微镜仍然是诊断疟疾的黄金标准，但它是劳动密集型的，取决于检查人员的技能[6.］．疟疾快速诊断检测(RDTs)是作为显微镜的一种简单、方便的替代品开发的，显微镜是一种用于快速干预的高度疾病谱，以避免与延迟诊断相关的危险[4.］．在过去10年里，卢旺达广泛使用氯喹处方给没有患疟疾的病人，这一做法得到了人们的容忍，部分原因是氯喹非常便宜。然而，现在，以青蒿素为基础的联合疗法每次治疗的费用至少高出10倍。可以考虑对疟疾流行地区的大多数病人进行疟疾快速诊断检测，特别是在非洲缺乏合格人力的电力条件差的地区。然而，很少有证据，特别是来自疟疾流行地区的证据，来指导决策者了解这些快速发展和滴滴涕的敏感性和特异性。因此，本研究比较评价了鲁卡拉卫生中心疟疾快速诊断试验与基于显微镜的染色技术的诊断效果。

1.2。研究目标

1.2.1。一般目标

确定Rukara保健中心诊断疟疾诊断基于疟疾诊断测试和微观染色技术的诊断性能。

1.2.2。具体目标

(我)确定快速疟疾诊断试验和基于微观的染色技术的敏感性诊断疟疾。（ii）确定快速疟疾诊断测试和基于微观的染色技术的特异性，以诊断疟疾。（iii）确定快速疟疾诊断试验和基于微观的染色技术的正负预测值，以诊断疟疾。

2.方法论

2.1。研究设计

这项研究是在鲁卡拉健康中心进行的。它位于卢旺达东部省的Kayonza区。本研究采用横断面研究设计。这项研究的目标人群都是来自卢旺达东部省Kayonza区各部门的疟疾疑似病例，他们于21日至21日期间在Rukara保健中心就诊^英石6月30日^TH.2017年7月。所有未被怀疑患有疟疾的患者均被排除在本研究之外。

2.2。样本大小

采用 在那里,N=所需样本量。Z.=置信度95%(标准值1.96)。P.=估计疟疾流行率，我们将获得的11%作为东部省的疟疾流行率(卢旺达健康调查，2016)。D.= 5%的误差幅度(标准值为0.05)。

样本量计算如下:

最后，样本量为264例。

2.3。抽样技术

使用连续设计的便利采样用于选择本研究的研究主题。

2.4。数据收集技巧

在本研究中，从患者文件收集人口统计数据到数据收集表单。这些填充了研究ID，人口统计（性别和区）和显微镜的疟疾地位以及RDT。检查收集的数据以完成，编辑到Microsoft Excel 2010表中，然后导入IBM SPSS进行统计分析。

2.5。标本收集程序

患者标本(毛细血管)用于RDTs诊断疟疾。按照推荐的方法制备厚涂片并进行giemsa染色[7.］．显微镜下观察giemsa染色涂片，定性(阳性)报告。giemsa染色涂片也使用以下公式进行定量报道:寄生虫/μL血=寄生虫计数× 8000个白细胞/μl除以数量的白细胞数量[8.］．进行了RDTs并进行了定性报道。RDTs和厚涂片结果记录在数据采集单上。使用了实验服、手套、载玻片和采血设备。

2.6。数据收集工具

数据收集表单用于收集数据，并将信息输入计算机。计算机用于安全存储和分析抽象的数据。

2.7。数据分析和演示程序

分类测量以数量和百分比报告。定量测量结果为平均值±SD(标准偏差)。采用表中公式计算定量方法RDT的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值1然后进行比较。使用IBM SPSS version 21统计软件包进行统计分析。

2.8。纳入标准

在参加该研究之前，该手稿中包含的患者没有接受任何抗疟疾药物。

2.9。道德考虑

该研究经肯尼亚大学卫生科学卫生学院的部门机构审查委员会审批，基加利。Rukara Health Center的研究委员会还要求伦理批准。为了保证机密性，数字被用作研究ID而不是患者数据收集表格上的名称或医院ID。

3.研究调查结果和讨论

3.1。研究科目的人口特征

表中给出了研究受试者的人口特征2．本研究包括共有150名研究参与者，87名（58％）女性和63名（42％）的男性。研究参与者的平均年龄是31.6±12.4，大多数人在25至44岁之间，少数民族超过65岁。

表中给出了RDT和定量方法测定疟疾的比例3.．快速诊断试验(HRP-2)阳性116例(77.3%)，阴性33例(22.0%)。定量方法中67.3%的样本为阳性，32.6%的样本为阴性。百分之六十四(64%)的测试样本积极RDT和量化方法,3.3%被RDT负但积极的量化方法,和19.3%的人消极RDT和量化方法,13.3%是正面RDT但负面的定量方法。

表中给出了吉氏显微镜和定量方法测定疟疾的比例4.．不出意外，吉氏显微镜法与定量法结果相同，均获得101(67.3.0%)阳性和49(32.6%)阴性结果。定量方法无阳性结果，镜检结果为阴性，定量方法无阳性结果。

３．２．演讲的结果

3.2.1。RDTS和GIEMSA显微镜诊断疟疾敏感性

RDTs (HRP-2)和吉氏显微镜对疟疾诊断的敏感性见表5.．本研究将定量方法作为参考方法。因此，64%的RDT和定量方法均为阳性的患者被认为是真阳性。RDT阴性、定量法阳性的患者占3.3%，均为假阴性。吉氏显微镜和定量法阳性检出率均为67.3%。如上所述，在吉氏显微镜下没有阴性结果，定量方法阳性，反之亦然。因此，吉氏显微镜假阴性结果为0.0%。计算RDT（HRP-2）的敏感性，发现均为95.0％，而Giemsa显微镜的敏感度为100％。

3.2.2。RDT和GIEMSA显微镜诊断疟疾的特异性

表中给出了RDTS（HRP-2）和Giemsa显微镜的特异性疟疾诊断6.．RDT法和定量法的阴性结果为19.3%，均为真阴性结果。RDT法阳性，定量法阴性，为13.3%，均为假阳性。另一方面，吉氏显微镜和定量法均阴性的32.6%为真阴性，而吉氏显微镜和定量法均阴性的阳性为0.0%和假阳性。计算RDT（HRP-2）的特异性，发现均为59.2％，而Giemsa显微镜的特异性为100％。

3.2.3。RDT和吉氏显微镜的阳性和阴性预测值

阳性预测值是指筛查试验呈阳性的受试者真正患有该病的概率。阴性预测值是指筛查结果为阴性的受试者真正没有患病的概率。RDT (HRP-2)和吉氏显微镜的阳性和阴性预测值计算如表所示7.．RDT阴性预测值为85.4%，阳性预测值为82.7%。这些结果意味着，如果RDT (HRP-2)对疟疾的检测为阴性，则有85.4%的几率没有患病。当用RDT (HRP-2)检测疟疾呈阳性时，有82.7%的几率真正患有疟疾。吉氏显微镜阴性和阳性预测值均为100%。

4.讨论

该研究表明，RDT（HRP-2）的敏感性为95.0％，RDT（HRP-2）的特异性为59.2％，而GIEMSA显微镜的特异性和敏感性为100％。RDT的阴性和阳性预测值分别为85.4％和82.7％。Giemsa显微镜的阴性和阳性预测值为100％（表3.-7.)．这些参数的计算公式如表所示1．Giemsa显微镜的结果与定量方法的结果相同，其中均为101（67.3.0％）阳性和49（32.6％）负效果（表4.)．本研究共纳入150名研究参与者，其中女性87名，男性63名，研究参与者的平均年龄为31.6±12.4岁(表)2)．人口统计学特征对敏感性、特异性和预测值的科学计算没有贡献。

类似的研究在非洲和尼日利亚开展[9.- 安哥拉[10.]和乌干达[11.］．在文献综述中，所有这些研究得到的Giemsa镜检的灵敏度、特异性、NPV和PPV都低于我们。这种差异被认为是由相似方法评价的微观定性方法造成的。然而，在这些研究中，PCR被用于评估RDTs和Giemsa镜检。

本研究获得的RDTs的敏感性(95.0%)高于Olusola等人在尼日利亚(62.3%)、Cláudia等人在安哥拉(60%)和Vincent Batwala等人在乌干达(91.0%)进行的研究。本研究获得的RDTs的特异性(59.2%)低于Olusola等在尼日利亚(87.4%)和Cláudia在安哥拉(94.3%)的研究。本研究获得的NPV和PPV(85.4%和82.7%)与Olusola等在尼日利亚获得的NPV和PPV相似;然而，安哥拉Cláudia(94.8%和70.7%)和乌干达Vincent Batwala等人(95.8%和88%)的研究得出了不同的结果。

假阴性RDT的可能解释是PFHRP-2基因内的缺失或突变或其他人报告的促置效果[12.那13.］．然而，在大多数综述的研究中，RDTs明显比显微镜更敏感，这可能证实了RDTs检测显微镜阈值以下寄生虫的能力，如前所述[14.那15.］．

RDT和镜检在疟疾治疗中有很大的影响。事实上，如果RDT在最初阶段呈阳性，没有任何抗疟药物史，患者可以使用抗疟药物治疗。另一方面，如果RDT在最初阶段是阴性的，则需要用显微镜来确认感染，因为它可能是一个有害的突变。同样清楚的是，如果寄生虫的数量非常低，显微镜上的假阴性结果可能是由于在显微镜阅读方面缺乏专业知识，这是能力建设中的一个常见问题。同样值得注意的是，RDT检测基因，而显微镜检测寄生虫;因此，如果病人因为几乎类似的症状而去医疗机构就诊，RDT可能是阳性的，而显微镜下可能是阴性的。另一方面，这可能是由于未完成剂量引起的疾病复发。因此，建议在再次撤退病人之前重新做这两项检查，以避免任何过量。

5。结论

根据目前研究的结果，敏感性，特异性和Giemsa显微镜（所有100％）的正面和阴性预测值均高于组氨酸富含蛋白2的疟疾的快速诊断试验（灵敏度（95％）），特异性（59.2％）和PPV（82.7％）和NPV（85.4％）。值得明确的是，RDT是对疟疾诊断进行快速干预治疗的诊断。在富含组氨酸中获得的结果基于蛋白质2的蛋白质2的疟疾寄生虫的快速诊断测试应通过具有高特异性的测试来确认。进一步的实验研究应制定最合适的疟疾诊断类型的快速诊断测试，以与Giemsa显微镜结合使用。此外，敏感性和敏感性应评估RDT（HRP-2）和GIEMSA显微镜的特异性，分子生物学技术评估。

数据可用性

所有的材料和数据都是可用的。

的利益冲突

作者声明没有利益冲突。

作者的贡献

EKG收集样品并进行了RDT和微观染色技术。JBN修订了工作并批准了它。所有作者都读过并批准了稿件。

致谢

提交人感谢Rukara保健中心在实验室工作期间提供的设施。他们也感谢肯亚山大学批准了这项研究。该项目由卢旺达的肯尼亚山大学资助。

参考

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