抽象性

后台.胃肠功能失常是一种常见胃肠病,严重影响生活质量。传统中医被广泛使用为胃肠机能失常的替代治疗acesin是一种天然flavoid复合物,具有抗氧化物和抗炎性、抗抑郁物和抗癌性然而,Acacetin处理胃肠机能失常的功效尚未得到研究。目的是调查Acacetin缓冲胃机能失序机制 及其基于网络药理学的功效方法论.网络药理学预测活性构件,匹配胃肠功能失常WSD目标并调查其潜在药理机制GO和KEGG浓缩分析维沃并调查Acacetin对胃肠机能失常模型的影响结果.基于网络药理学方法,WSD关键有效成份识别为acestin,浓缩信号路径为PI3K-AKT信号路径acestin和Mosapride加速胃空闲时间,降低胃剩余率,提高小肠推进率GAS和MTL使用Acacetin后提高水平结果表明Acacetin可改善胃肠功能失常高剂量Acacetin显示效果更好acestin可调节小鼠蛋白和脂新陈代谢与胃肠运动失序况且,Acacetin可调制胃肠炎和吸附症检测PI3K-AKT信号路径相关蛋白显示Acacetin阻抗PI3K-AKT信号路径激活,改善胃肠机能失序结论.关键成分AcacetinWSD可阻抗PI3K-AKT信号路径基于网络药理分析acestin处理效率安全为胃肠机能失序临床处理提供强大的实验支持

开工导 言

胃肠机能失序是一种常见胃肠病,严重影响生活质量和社会经济代价一号..特征为异常运动功能、感官函数或密钥函数改变肠功能并引致重大疾病重负2..全世界数以百万计的病人患有胃肠机能失常症,其中包括慢性恶心和呕吐等虚弱症状3..最严重的胃肠功能失常可直接导致肠功能失效4..据报多达80%重病患者患胃肠功能失常重病患者胃肠机能失灵或胃肠机能失灵与增发和死亡率相关5..除运动失序外,导致内侧感知阈值下降的因素常见于功能肠道疾病的发源法中[6..然而,胃肠机能失序的病理尚不清楚,并可能与胃肠超敏度、受损食物摄取调控、延迟胃空置、脂质新陈代谢和神经心理学因素密切相关虽然开发了许多药处理胃肠机能失常问题,但目前很少有药可用

中医是中华民族的宝藏数千年实践经验为预防和治疗人类疾病做出了重要贡献7..目前,TCM被广泛使用作为胃肠机能失常的替代治疗方法微信解码由Ratix Bulerum 10g、Cyperus转成10g、unridehorange 10g、Rhizomaaatratyrodes 10g、WhitePeony 10g、Frututstosendan 6g、Rhizomacordalis 10g、Inula花际10g和Charred药化listen 10g组成,可缓解肠质失序8..然而,WSD对胃肠机能失常的确切机制尚不清楚

近些年来网络药理学蓬勃发展后,出现了寻找治疗药的新方法九九..网络药理学综合分析TCM编程提供强效工具建立网状复合蛋白/基因故障并揭示小分子规范原理10..核心理论是一种全新系统化网络目标法11..整体理论与网络药理学和网络生物新产生核心思想大相径庭系统解决复杂疾病需求,如癌症12..研究网络药理学 研究WSD关键活性成分机制

二叉素材方法

2.1.疾病目标识别网络搭建

TCMSP在线数据库https://tcmspw.com/tcmsp.php)[13用于检索WSD组件中的ADME参数信息 [14列成预测组件目标内含复合物由瑞士目标预测数据库识别http://www.swisstargetprediction.ch/)[15目标概率大于0最终控制GeneCards数据库搜索人类基因关键字https://www.genecards.org/)[16NCBI基因数据库https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)[17m数据库https://www.omim.org/)[18号..GenesCards数据过滤适切分中值以获取更多相关目标在R软件分析中,所有药质标本和与疾病有关的蛋白质分类为两个独立组筛选药标和疾病目标输入Venn 2.毒病常用目标输入String数据库https://string-db.org/cgi/input.pl建构蛋白质交互网络19号..树类设置为智人类并置可靠性为>0.9为了更好地了解组件、疾病和对应目标之间的复杂交互关系,根据包括组件、治疗性疾病和目标搭建了一个组件-疾病-目标网络图,并输入子形3.8.0绘制网络图数位分析由网络解析器执行20码..评分大于平均值的基因通过度排序选择为关键目标研究中关键基因通过MCODE分析筛选21号..

2.2.生物信息注释

GO生物过程、分子函数和细胞组件浓缩 使用String数据库筛选聚类Profiler、Enterplot和ggplot2包安装,R3.6.3软件用于直方图和泡块制作KEGG路径浓缩分析 并使用String数据库筛选

2.3建立DGIM模型

成人SPFC57BL/6雄鼠在一个温度和湿度控制动物设施中按12小时光/黑循环提高小鼠随机划分为9组,每组12小鼠分解成控制组、模型组、低用Acacetin组、中用Acacetin组、高用Acacetin组、Mosapride组(阳性控制)。acestin从Selleck化工公司购买(#S5318,美国得克萨斯州休斯敦),溶解二甲基二亚胃肠动症模型由阿托品导出22号..acetin口服LAG、MAG和HAG分别为10、25和50mg/kg23号并口服1.37 mg/kg24码..蒸馏水(10ml/kg)分送CG和MG所有治疗组每天治疗一次14天14天除CG外服药1小时后,向其他组注入阿托品1.5 mg/kg30分钟后所有小鼠口服0.5毫升半固粘贴(0.2%CMC-na和5%碳),30分钟后采集血液

2.4.毒气残留率和小试发率

鼠口服0.5ml半固糊总胃权值和净胃权值之差为腹部剩余权值,腹部剩余权值百分比和半固粘粘度权值累余率鼠标小肠平面无牵引度测总长度从pylorus到ileocal面积和从pylorus到碳前端距离半固粘贴延和小肠总长度百分比为小肠推进速率25码..

2.5Enzyme链接Imunosorbent解析

ELISA测试血清催化素(GAS)和moltilin(MTL),血清蛋白代谢指数前排素(PAB),Cerulaplasmin(CER)和转移rin(TRF)和脂质代谢指数三叉化(TG),低密度脂质胆固醇(LDL-C),高密度液态胆固醇(HDL-C),全胆固醇(TC)和阻发性因子TNF-αIL-1辰族和IL-6级GAS、MTL、PAB、CER、TRF、TNF-αIL-1辰族GAS(#CSB-E12743r,CUSBIO,中国)、MTL(#CSB-E08208r,CUSBIO,中国)、PAB(MLBIO,中国)、CER(MLBIO,中国)、TRF(#CSB-E12723r,CUSBIO,中国)、TNF-αCSB-E11987r,CUSABIO中国)IL-1辰族CSB-E08055r/CUSBIO/CESB-E04640r/CUSBIO/GAS、MTL、PAB、CER、TRF、TNF-αIL-1辰族IL-6计算使用Bio-Tek微板分析器(MB-530,HEAES,中国)TG、LDL-C、HDL-C和TC的集中由TG(#A110-2-1中国南京生物工程学院)、LDL-C(#A113-2-1中国南京生物工程学院)、HDL-C(#A112-2-1中国南京生物工程学院)和TC(#A111-2-1中国南城生物工程学院)根据指令检测

2.6量化实时PCR

相对表达级别Bcl-2-Bax-Caspase-12TNF-αIL-1辰族和IL6胃蚁组织由qRT-PCR检测全RNA使用Trizol方法提取RNA根据反转转录包指令反转录入cDNAs (#4368814,Invitrogen,USA)。SYBR绿色qPCR混合技术测试ABI7900系统基因相对表达相对水平基因计算 方法带辰族行为内部基因素数序列本研究显示于表一号.

2.7西布洛特

RIPA解析缓冲区(#P0013B,Beyotime)应用从胃动脉组织提取总蛋白蛋白质混合SDS-PAGE加载缓冲区蛋白质用凝胶电阻分离并转至PVDF膜并用稀释原生抗体TNFα255275 1:1000 Abcam,UK)IL-1辰族9722,0.2华府g/ml,Abcam,UK)、IL-6(ab233706,1:1000,Abcam,UK)、Bax(ab325031:5000,Abcam,UK)、Caspase-12(ab6263,1华府g/ml、Abcam、UK)、Bcl-2(AB1828581:2000Abcam、UK)、PI3K(ABP16061:5000、Abcam、UK)、PPI3K(ABB1826511:800Abcam-UK)、AKT(10176-2-AP1:1000,Proteintechtetech 美国)、PAKT(6644-1Ig、1:5000Porteintech辰族-09-1-Ig,1:5000,Proteintech,USA)室温90分钟二级抗体HP山羊反鼠IgG(SA0001-1:5000Porteintech,USA)或HP山羊反拉比特IgG(SA0001-1:600/Proteintech,USA)用薄膜孵化90分钟蛋白带由Chemicope6100系统检测(Clinx公司有限公司,中国上海)。蛋白质带综合密度由质数One4.6.2软件确定,并用去测量集成密度和后台集成密度校正辰族Actin使用内部引用检测相对表达式

2.8Imnoisto化学

PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT表达式被IHC检测到切片60摄氏12度切片去水加热修复抗原1%周期酸加法,内生酶在室温10分钟内停机PI3K(ab151549,1:100bcam,UK)、pPI3K(ab182651,1:100bcam,UK)、AKT(10176-2-AP,1:100pteintech,USA)和pAKT(6644-1-Ig,1:100pteinte二级抗体在37摄氏度注入30分DAB用于色度开发,Hematoxilin恢复10分钟,用蒸水冲刷,PBS恢复为蓝5分钟内所有水平酒精脱水清除后,乙型六氯环己烷置入乙型六氯环己烷10分钟后用中性口香糖密封并观察显微镜取四百倍视图图像支持6.0分析软件选用IOD分析平均光密度显示PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT相对表达式

2.9统计分析

统计分析使用GreaphPad8.0软件进行,3个独立实验数据表示为 SD)无依无靠 -测试在符合正常分布的两组间使用单向差分分析多组间进行,然后是Tukey后期测试 被认为具有统计意义

3级结果

3.1.WSD假设目标

研究中TCMSP在线数据库https://tcmspw.com/tcmsp.php)[13用于检索WSD组件中的ADME参数信息 [14列成预测组件目标内含复合物由瑞士目标预测数据库识别http://www.swisstargetprediction.ch/)[15目标概率大于0最终控制补充表显示一号共包含15个活动组件显示每种成分平均物理化学值,包括分子权值(MW)、辛醇与水分配系数值(ALogP)、氢币捐献者(Hdon)、氢币接受者(Hacc)、口服生物可用性(OB)、血液脑屏蔽(BBB)、DL和分水部分充电所有原子可达表面积补充表2WSD显示共460目标复合物GeneCards数据库搜索人类基因关键字https://www.genecards.org/)[16NCBI基因数据库https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)[17m数据库https://www.omim.org/)[18号..GeneCards数据过滤适切分中值以获取更多相关目标查找后,Genescards数据库中发现2 691个基因,CBI数据库中发现3个基因,OMIM数据库中发现618个目标合并删除这三个数据库后,获得了3216个与胃肠机能失常有关的基因

3.2网络目标分析

在R软件分析中,所有药质目标以及与疾病有关的蛋白质都分类为两个独立组筛选药标和疾病目标输入Venny2.1图中显示1(a)共228项常用目标取自Venny图中筛选药物目标与疾病目标毒病常用目标输入String数据库https://string-db.org/cgi/input.pl)[19号建PI网络树类设置为智人类并置可靠性为>0.9PPI网络有228节点和1017边缘,平均程度为8.92图1(b)PPI网络图显示药故障常用目标同时,我们搭建组件-疾病-目标网络图1(c))为了更好地了解组件、疾病和对应目标之间的复杂交互关系,向子形3.8.0输入了一个组件-疾病-目标网络图以绘制网络图后由网络解析器分析20码..研究中发现15活性成份越高度值越重要分量2)中间有Acacetin最高学位acestin可能是WSD关键有效成份

3cm3预测功能浓缩分析wsd

R包提供GO注解浓缩分析,包括CC、MF和BP分析GO注解显示,药物失序交叉蛋白主要与细胞对药物的反应、peptidyl-tyrosine磷酸化、BPeptidyl-tyrosine变换、国家细胞体、CC合成膜、蛋白塞松/threonine树脂活性以及MF蛋白调频活动相关2(a))KEGG浓缩分析与PI3K-AKT信号路径、MAPK信号路径和癌症proteoglycans密切关联2(b))网络图显示多构件多目标作用特征图中显示3蓝化综合体包括Acacetin、Galangin、dhycapsacin、Matairesinol、albiflorin和插件黄网目标 绿色网程前20名基于预测分子机制 和网络分析结果维沃实验测试Acacetin能否抑制胃肠炎和potosis从减轻胃肠机能失常

3.4.acestin改进磁盘胃运动

通过构建胃肠分解模型,我们发现与CG相比,胃空置延迟,胃剩余率提高,小肠推进率在MG下降与MG、Acacetin和Mosapride加速胃空闲时间相比,胃剩余率下降,小肠推进率提高研究结果显示,acecitin和Mosapride可提高胃肠机能,高剂量acecetin效果更好4(a))ELISA结果显示,与CG相比MTL和GAS内容大为下降与MG相比,GAS和MTL使用Acacetin和Mosapride后增加值4(b))结果表明,acecitin可规范有胃肠功能失常的小鼠GAS和MTL内容,高剂量Acacetin效果更好

3.5acestin调节蛋白质和lipid气囊运动错位代谢

研究acestin对胃肠机能失序的减轻效果 是否与蛋白质和脂质新陈代谢相关, 我们使用ELISA检测与蛋白代谢和脂质新陈代谢相关的指标ELISA结果显示,MG与CG相比PAB、CER和TRF水平下降与MG、PAB、CER和TRF相比,Acacetin和Mosapride处理后水平大增5(a))与CG相比,血清TG水平提高,LDL-C、HDL-C和TC水平在MG显著下降与MG相比,血清TG水平下降,LDL-C、HDL-C和TC水平在Acacetin和Mosapride处理后提高5(b))结果表明,acecitin可调节胃肠动脉小鼠蛋白和脂新陈代谢,高用Acacetin效果最优

3.6.acestin调节胃炎

调查Acacetin对肠道炎和吸附症的影响时,我们先检测到与炎症相关指示数的水平。与CG相比血清水平TNF-αIL-1辰族和IL-6大增MG对比MGTNF-αIL-1辰族和IL-6在Acacetin和Mosapride处理后下降6(a))高剂量Acacestin效果最佳,表示Acacetin可抑制炎症响应接下去,我们验证potosis相关标识值qRT-PCR和Westbrowt结果显示,与CG相比,Bcl-2表达式下降,Bax和Caspase-12表达式提高,ProblicticalcytokinesTNF表达式提高αIL-1辰族和IL-6提高MG与MG相比,Bcl-2表达式提高,Bax和Caspase-12表达式下降,αIL-1辰族和IL-6处理Acacetin和Mosapride后也下降6(b)并6(c))结果表明Acacetin可调控胃肠炎和吸附症

3.7acestin改进肠道阻抗PI3K-AKT信号路径启动

基于KEGG浓缩分析结果,我们分析Acacetin在管理PI3K-AKT信号路径中的作用Westblot和IHC测试PI3K-AKT信号质素PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT表达结果表明Acacetin和Mosapride提高p-PI3K和p-AKT表达式通过下调PI3K和AKT,胃肠功能失常得到改善,高剂量Acacetin效果更好7(a)并7(b))总的来说,这些数据显示高剂量Acacetin通过抑制PI3K-AKT信号路径激活可改善胃肠功能失常

4级讨论

胃肠功能失常是一种常见胃肠病,严重影响生活质量。基于网络药理方法,我们进行了多项实验结果表明高剂量Acecitin可调控PI3K-AKT信号路径抑制胃肠炎和吸附症并调控蛋白代谢和脂代谢GAS和MTL内装有胃肠功能失常的小鼠并增强胃空能力是有益的,后者在缓解胃肠功能失常方面起着关键作用。

各种荷尔蒙在胃机能调节作用,其中GAS和MTL是与胃肠机能失常相关联的主要荷尔蒙GAS是一种关键的胃肠激素,主要由G细胞隐蔽26..GAS可偏向调制气态酸分解以保持气态平衡,GAS生理级可促进气态排空27号..MTL为MLN基因编码的蛋白质,可引起分解性过渡复合运动第三阶段的密集收缩,促进肠胃肌肉收缩并加速胃空取28码..研究发现可食用植物Salsola Collina可促进胃空和肠道推进29..功能肠病减肥使用灭蚁药后GAS和MTL水平将大幅提高[30码..研究中GAS和MTL水平在Acacetin和Mosapride处理后提高实验建议Acacetin可调制胃肠动脉小鼠的GAS和MTL水平,高剂量Acacetin效果最佳

SerumPAB是评价营养不良病人的有效工具31号..据报研究组PAB水平比控制组高得多,控制组在胃癌外科后提供侧侧营养32码..CER是哺乳类等离子体中一种有色氧化酶,在铁代谢中起着关键作用三十三..TRF被认为是多益有害金属离子输入细胞的“交送系统[34号..据报道,与健康人相比,炎性肠病患者有异常脂新陈代谢35码..克罗恩病患者、脂质剖面图、脂质集中度和组成物以及氧化抗氧化状态均受干扰36号..我们推测蛋白质和脂质新陈代谢异常可能与胃肠机能失常相关结果表明,使用Acacetin后,PAB、CER和TRF水平大幅提高,LDL-C、HDL-C和TC水平提高,TG水平下降结果表明高剂量Acacetin可调控胃肠动症小鼠蛋白新陈代谢和脂代谢,高剂量Acacetin最有效分析养分代谢指数和疾病条件之间的相互关系可能有助于提供更好的临床治疗并改进预测性

发生胃肠机能失常时,细胞素调节受创区炎情响应可分解炎因子acestin有抗氧化物和抗炎效果37号..研究脑缺损复发 TNF表达式αIL-1辰族后IL-6与中间脑动脉隔离组比大减38号..acestin可抑制TNF增长αIL-6和IL-1辰族以依赖剂量方式模拟人周期回容细胞并抑制细胞吸附三十九..研究中TNF层次αIL-1辰族使用acestin后IL-6下降,Bcl-2表达式提高,Bax和Caspase-12表达式下降分析结果显示,acecitin可调节胃炎和potocisy,高剂量acestin效果最佳PI3K-AKT信号路径作为经典信号路径在疾病中起着关键作用Caulis Scentodoxae可规范PI3K-AKT信号路径以产生反炎效果40码..PI3K可响应LPS和TNF-α激活AKT并影响NF-百货公司B产生反吸食和阻燃效果41号..高吸量Acacetin阻抗PI3K-AKT信号路径激活,改善肠胃机能失常

然而,我们的研究有一些局限性表显示2Acacetin为64级,Galangin为63级两种复合物在物学参数方面没有明显不同因此,我们也应该实验性评价Galangin的治疗效果但由于实验基金有限,目前无法实验评价Galangin的治疗效果未来,我们将进一步调查加朗宁对胃肠机能失常和机制的影响,并比较阿卡塞丁和加朗宁的功效

高吸量Acacetin调控PI3K-AKT信号路径抑制胃肠炎和吸附症,调控蛋白代谢和脂代谢,帮助调控GAS和MTL水平acestin处理效率高安全性强,可显著改善胃肠机能失常小鼠,改善肠组织超结构并抑制炎情响应研究提供强力实验支持 临床处理胃肠功能失常

数据可用性

所有可用数据信息均载入文章

利益冲突

所有作者都称彼此间没有潜在利益冲突

感知感知

作者感谢湖南大学中医实验室第一附属医院为实验提供空间和素材这项研究得到了中国自然科学基金会的支持8190176湖南自然科学青年基金2019J50463和湖南传统中医大学建设中国一流学科(2018-2020年)。

补充素材

补充素材补充表1:微水解码中共15个有效组件补充表2:微信解码中共460目标化合物高山市补充素材)